本公司开发了简单快捷的大豆源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒，根据大豆保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的大豆成分， 但不能检测其他非榛子成分。

产品简介：

本试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有大豆源性成分。现代食品加工  工艺极大改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的  感官鉴别技术已经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏  性，因此基于基因检测的快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供  重要的保障。本公司开发了简单快捷的大豆源性成分探针法荧光定量 PCR 检测试剂盒。

产品特点：

1.即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。

2.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

3.根据大豆保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的大豆成分，  但不能检测其他非榛子成分。

4.对混合样品中大豆成分的检测下限为 0.01%，对样品中大豆成分的核酸检测下限为 0.1ng/µL。

5.既可以定性检测，也可以定量检测。用于定量时线性范围至少有 5 个数量级。

6.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

7.一管式闭管操作，降低了交叉污染。

8.快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。

9.大豆源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒只能用于科研，足够 50 次 20uL 体系的荧光定量 PCR。

产品参数：

产品规格

50T/盒，可满足一定规模的检测需求。

检测方法

实时荧光PCR，具有快速、准确、灵敏等优点。

试剂盒成分

2×Probe qPCR MasterMix、荧光 PCR 专用模板稀释液、超纯水、大豆源性成分qPCR 引物-探针干粉、大豆源性成分qPCR 阳性对照(1×10E7 拷贝/μL)、使用手册。

自备试剂

样品 DNA。

保存和运输

低温运输，-20℃保存，保存期限为 24 个月。

使用方法：

一、稀释标准曲线样品（以 10E1-10E6 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能

污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原， 本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2，1。

2.用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。

3.在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4.换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用

5.换枪头，在 4 号管中加入 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用

6.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7.如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性

对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 上步所得 4 号稀释液再加上一定量的水使总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样本体积  一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。

8.用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数样品 DNA-提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的核酸-提取试剂。

三、Probe qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）

9.如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（直接用第 6 步第 4 号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设  置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好

后最后加）：

成分样品管PCR 阴性标准曲线样品管N+2 个对照（1-6 管）

2×Probe qPCR MasterMix各 10 μL10 μL各 10 μL

大豆源性成分 qPCR

引物-探针混合液各 3 μL3 μL各 3 μL

N+2 个待测 DNA 样本各 7 μL不加不加

超纯水不加7 μL不加

第 6 步所得标准曲线样品稀释液

（1-6 号）

不加

不加各 7μL（2 号样

到 2 号管，3 号样到 3 号管…）

11.盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR：

过程温度时间

预变性95℃5min

PCR 反应

（45 个循环）95℃15 sec

60℃60 sec（采集 FAM 通道的荧光信

号，设置 BHQ 为淬灭基团）

四、数据处理

12.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。

13.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须无 Ct 或 Ct 大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于 40，否则实验无效。如果实验有效，则分析待测样品，如果无Ct 或 Ct 大于或等于 40，则为阴性。如果 Ct 小于 40 则为阳性。

选择我们的大豆源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！