本公司开发了简单快捷的马铃薯源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒，既可用于定性检测，又可用于定量检测。

产品简介：

本试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有马铃薯的成分。现代食品加工工艺极大改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的感官鉴别技术已经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏性，因此基于基因检测的、快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供重要的保障。此外还有很多情况需要检测非食品样本中是否有马铃薯源性成分。本产品就是为满足这些需求根据 PCR 原理开发的产品。

产品特点：

1.即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。

2.引物和探针经过优化，灵敏度高，最-低检测限可达 100 拷贝/反应。

3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4.特异性高，引物是根据马铃薯基因组 DNA 高度保守区设计，不会跟其它生物的

DNA 发生交叉反应。

5.既可定性检测，又可定量检测。定量检测时，线性范围至少 5 个数量级。

6.本产品足够 50 次 20 μL 体系的探针法荧光定量PCR 反应。

7.马铃薯源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒只能用于科研。

产品参数：

产品规格

50T/盒，可满足一定规模的检测需求。

检测方法

实时荧光PCR，具有快速、准确、灵敏等优点。

试剂盒成分

2×Probe qPCR MasterMix、荧光 PCR 专用模板稀释液、超纯水、马铃薯源性成分qPCR 引物-探针干粉、马铃薯源性成分qPCR 阳性对照(1×10E7 拷贝/μL)、使用手册。

自备试剂

超纯水，样品 DNA。

保存和运输

低温运输，-20℃保存，保存期限为 24 个月。

使用方法：

一、稀释标准曲线样品（以 1E1-1E6 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。

由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供 DNA 片段作为阳性对照。

1.标记 6 个离心管，分别为 6、5、4、3、2、1。

2.用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，最好用带芯枪头（下同）。

3.在 6 号管中加入 5 μL 1E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡混匀 1

分钟，得到 1E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4.换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡混匀 1 分钟，得到 1E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5.换枪头，在 4 号管中加入 5 μL 1E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步所得)，充分震荡混匀 1 分钟，得到 1E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6.依次重复上面的操作得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7.如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对

照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10 μL 上步所得 4 号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为 PC。另外用水作为 NC。

8.用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数样品 DNA-提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的核酸-提取试剂。

三、qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）

9.如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照（直接用第 6 步第 4 号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设

置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：

成分样品管

N+3 个PCR 阴性

对照管标曲样品管

（1-6）

2×Probe qPCR MasterMix各 10 μL10 μL各 10 μL

马铃薯源性成分 qPCR

引物-探针混合液各 3 μL3 μL各 3 μL

待测样本 DNA 模板7 μL不加不加

超纯水不加7 μL不加

第 6 步所得标准曲线样品稀释液（1-6 号）

不加

不加各 7 μL（1 号样到 1 号管，2 号样到 2 号管…）

四、数据处理

12.如果扩增阳性对照或制备阳性对照结果为阴性，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要重做扩增或制备或跟厂家联系。如果扩增阴性对照或制备阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系，购买新的引物和探针。

13.如果阴性对照和阳性对照正常，则实验有效，可以进入后续分析。

14.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。

15.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须无 Ct 或 Ct 大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于 40，否则实验无效。如果实验有效，则分析待测样品，如果无 Ct 或 Ct 大于或等于 40，则为阴性。如果 Ct 小于 40 则为阳性。

选择我们的马铃薯源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！