艰难拟梭菌，斜面、穿刺菌和冻干粉应在 4-10 度保存，甘油菌在-80 度保存。研究；教学；分类；分析检测。

菌种名称：艰难拟梭菌

英文名称：Clostridioides difficile

培养基 特殊蛋白胨：23.0，可溶性淀粉：1.0，氯化钠：5.0，琼脂：10.0，脱纤维羊血：5%(50℃添加)，pH：7.3±0.2（25℃） 

生长条件 37℃；48-72h；厌氧； 

存储条件 2-8℃ 

安全等级 2 

形态 菌落直径为1-2mm，形状不规则，边缘不规则，不透明，正面灰白色，形态扁平，表面光滑，质地湿润，G＋（蓝紫色），杆菌，纯度：纯 

模式菌株 no 

操作步骤 ①准备上述1支无菌水和平板 1 块（提前置于厌氧环境除氧24h）；②安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；③吸取 200μL无菌水打入冻干管，充分溶解菌粉后，打入平板中，涂布均匀；④将平板置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。 

注意事项：

1.微生物菌种应保存于低温、清洁和干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

2.艰难拟梭菌操作在无菌条件下进行，接种完毕应该灭菌再做丢弃处理；

3.斜面菌种和穿刺菌种保存时间通常为 3-6 个月，应根据菌种状况及时结转；冻干粉保存时间通常是 2-25 年；甘油菌保存时间为 2-5 年。

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