白介素是一类重要的细胞因子，在免疫调节、炎症反应、细胞增殖与分化等生理和病理过程中发挥关键作用。白介素Elisa检测试剂盒是科研和临床实验室中用于定量检测血清、血浆、细胞培养上清等样本中白介素（如IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10等）浓度的常用工具。其检测结果的准确性依赖于规范的操作流程。以下是正确使用
白介素Elisa检测试剂盒的标准步骤。
一、实验前准备
试剂与样本恢复至室温：将白介素Elisa检测试剂盒各组分（包被板、标准品、酶结合物、稀释液、洗涤液等）从2-8℃冰箱取出，平衡至室温（约30分钟），避免冷凝水影响反应。
配制洗涤液：浓缩洗涤液使用前需用蒸馏水或去离子水按比例稀释（如1:20），充分混匀。若有结晶，先于37℃溶解并冷却后再稀释。
标准品复溶与梯度稀释：按说明书用稀释液溶解标准品，配制成高浓度原液，然后进行倍比稀释（如1:2），建立标准曲线（通常6-8个浓度点），同时设空白孔（只加稀释液）。
二、加样操作
加标准品与样本：将标准品和待测样本（血清、血浆等需按要求稀释）分别加入已包被特异性抗体的微孔板中，每孔100μL，设复孔以提高准确性。
封板：用封板膜覆盖板孔，防止污染和蒸发。
三、孵育与洗涤
第一次孵育：将微孔板置于37℃恒温箱中孵育1-2小时（具体时间依试剂盒而定），使样本中的白介素与固相抗体充分结合。
洗涤：孵育结束后，手工或自动洗板机用洗涤液冲洗微孔5-6次，每次注满并停留30秒，拍干残液，避免交叉污染。
四、酶标抗体结合
加酶结合物：每孔加入100μL酶标二抗（如HRP标记的抗白介素抗体），封板后37℃孵育1小时。
再次洗涤：重复洗涤5-6次，去除未结合的酶标抗体。
五、显色与终止
加显色剂：每孔加入100μL显色底物（如TMB溶液），避光37℃孵育15-30分钟，观察颜色变化。
加终止液：每孔加入50μL终止液（如2MH2SO2），使反应终止，溶液由蓝色变为黄色。
六、读数与数据分析
测定吸光度：在15分钟内使用酶标仪在450nm波长读取各孔OD值，参考波长可设为630nm进行双波长校正。
绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。
计算样本浓度：根据样本OD值在标准曲线上查得对应浓度，再乘以稀释倍数，即为实际浓度。
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