细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（CCK-8）原理、使用方法及注意事项​​

​​一、产品概述​​

二、检测原理​​

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  ​​细胞增殖越多，代谢活性越强，生成的甲臜越多，颜色越深（吸光度越高）​​。
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  ​​细胞毒性越大，活细胞数量减少，甲臜生成减少，颜色越浅（吸光度越低）​​。
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  ​​检测波长​​：通常为 ​​450 nm​​（最佳），也可选用 ​​420-480 nm​​ 或 ​​600-650 nm（高浑浊样本参考波长）​​。

​三、使用方法​​

​​1. 细胞增殖/毒性实验步骤​​

1. 1.
   ​​细胞接种​​（96孔板）：
   • •
     ​​细胞增殖实验​​：每孔加入 ​​100 μL 细胞悬液（约2000个细胞）​​。
   • •
     ​​细胞毒性实验​​：每孔加入 ​​100 μL 细胞悬液（约5000个细胞）​​。
   • •
     （具体细胞数需根据细胞类型、生长速度调整）
2. 2.
   ​​药物处理​​（可选）：
   • •
     按实验设计加入 ​​0-10 μL 药物​​，培养 ​​6、12、24 或 48 小时​​。
3. 3.
   ​​加入CCK-8试剂​​：
   • •
     每孔加入 ​​10 μL CCK-8溶液​​（若初始培养体积为200 μL，则加20 μL）。
   • •
     ​​空白对照​​：仅含培养基+CCK-8（无细胞）。
   • •
     ​​药物对照​​（可选）：含培养基+药物+CCK-8（无细胞）。
4. 4.
   ​​孵育​​：
   • •
     ​​37℃ 孵育 1-4 小时​​（时间可通过预实验优化，通常2小时左右）。
5. 5.
   ​​检测吸光度​​：
   • •
     使用 ​​酶标仪​​ 测定 ​​450 nm​​ 吸光度（OD值）。
   • •
     （若无450 nm滤光片，可用420-480 nm；高浑浊样本可用600-650 nm作为参考波长）。
6. 6.
   ​​短期保存（可选）​​：
   • •
     若不能立即检测，可向每孔加入 ​​10 μL 0.1M HCl 或 1% SDS​​，避光室温保存 ​​24小时内​​ 测定。

​​2. 实验结果计算​​

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  ​​细胞活力（%）​​ = [OD(加药) - OD(空白)] / [OD(0加药) - OD(空白)] × 100%
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  ​​抑制率（%）​​ = [OD(0加药) - OD(加药)] / [OD(0加药) - OD(空白)] × 100%

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  ​​OD(加药)​​：含细胞+培养基+CCK-8+药物的孔
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  ​​OD(空白)​​：仅含培养基+CCK-8（无细胞）
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  ​​OD(0加药)​​：含细胞+培养基+CCK-8（无药物）

四、注意事项​​

1. 1.
   ​​细胞接种密度​​：需根据细胞类型调整，避免过度拥挤或过少影响检测灵敏度。
2. 2.
   ​​CCK-8试剂加入量​​：确保与培养基比例合适（通常10 μL/100 μL培养基）。
3. 3.
   ​​孵育时间​​：不同细胞代谢速率不同，建议预实验优化孵育时间（1-4小时）。
4. 4.
   ​​避免气泡​​：加样时避免产生气泡，否则会影响酶标仪读数。
5. 5.
   ​​空白对照设置​​：必须设置无细胞的空白对照，以扣除背景干扰。
6. 6.
   ​​药物干扰​​：某些药物可能影响CCK-8反应，可设置药物对照孔验证。
7. 7.
   ​​检测波长​​：优先选择 ​​450 nm​​，若样本浑浊可选用 ​​600-650 nm​​ 作为参考波长。
8. 8.
   ​​短期保存​​：若不能立即检测，可加酸或SDS稳定OD值，但需在24小时内完成测定。
9. 9.
   ​​避免反复冻融​​：CCK-8溶液应低温保存，使用前平衡至室温。