炎症因子ELISA检测试剂盒通过高特异性抗体识别，可定量检测血清、血浆、细胞培养上清等样本中的IL-6、TNF-α、IL-1β等关键炎症标志物。实验过程中常因操作细节、环境因素或试剂处理不当，导致标准曲线异常、背景过高或重复性差等问题。掌握科学的应对策略，是确保
炎症因子ELISA检测试剂盒高效捕获目标分子的关键。
1、标准曲线线性差或R2值偏低
可能因标准品溶解不充分或梯度稀释错误。应使用推荐缓冲液充分溶解标准品，轻柔混匀，避免剧烈震荡产生气泡。稀释时使用多通道移液器，确保梯度准确，每步更换枪头防止交叉污染。标准品现配现用，避免反复冻融。
2、空白孔或阴性对照OD值过高（背景高）
多因洗板不全、封闭不充分或底物孵育时间过长。应严格按说明书进行洗涤（通常3–5次），确保洗液注满每孔并拍干。检查封闭液是否有效，孵育时间与温度是否合规。底物显色后及时终止，避免过度反应。
3、样本检测值超出标准曲线范围
若OD值过高，说明样本浓度过高，需进行预实验确定合适稀释倍数。若过低，可能是样本中目标因子含量极低或已降解。建议使用新鲜样本，避免反复冻融；离心去除杂质，防止干扰。
4、孔间差异大或重复性差
多因加样不均、温育不均或边缘效应。使用校准过的移液器，垂直加样，避免气泡。将酶标板置于恒温孵育箱中央，避免边缘温度波动。可使用板膜覆盖，减少蒸发。
5、无信号或信号极弱
检查试剂是否在有效期内，特别是酶标二抗与底物是否失效。确认试剂未被污染或误用（如A/B液加反）。确保洗涤缓冲液中已添加Tween-20，浓度正确（通常0.05%），否则影响抗体结合。
6、阳性对照无反应或反应弱
先确认阳性对照是否按要求复溶与稀释。检查二抗是否与一抗种属匹配（如兔源一抗需配抗兔二抗）。若使用自备抗体，需验证其活性与特异性。
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