酵母质粒DNA 纯化试剂盒（过柱法）即开即用，经济实惠，客户自己不需要准备额外的试剂。

产品简介：

本产品是专门用于提取酵母质粒 DNA 的产品(不适用于酵母 dsRNA 质粒)。是根据酵母细胞壁十分坚硬的特点，在细菌质粒碱裂解法的基础上，增加了高效裂解酵母细胞壁的预处理步骤，可在 1 小时左右得到可以用于 PCR 或转化酵母质粒 DNA。

产品特点：

1.即开即用，经济实惠，客户自己不需要准备额外的试剂。

2.实验快速，整个过程只需要一个小时左右，可同时处理多个样品。

3.得到的酵母质粒 DNA 纯度高，可直接用于转化和 PCR 等实验。

4.可以从平板上的菌斑或液体培养的酵母中抽提质粒 DNA。

5.安全，不需使用玻璃珠、酚、氯仿等试剂。

6.每 5-10mL 酵母培养液一般可以提取到 1μg 左右的高拷贝酵母质粒 DNA。

7.酵母质粒DNA 纯化溶液 C 中有蓝色染料，便于目测非常关键的碱变性和中和反应两步的溶液混匀状况，保证实验效果。

8.本产品足够 50 次的酵母质粒 DNA 微量提取。

9.酵母质粒DNA 纯化试剂盒（过柱法）只用于科研。

产品参数：

产品规格

保存和运输

常温运输和保存，其中破壁酶和 RNase A 溶液需要低温运输，-20℃保存有效期一年。

自备试剂

无菌水

使用方法：

1.将 5-10mL 酵母过夜液体培养物分多次转移到 1.5mL 塑料离心管中。每转移一次后，需要 14000×g 室温离心 1 分钟，然后吸弃液体培养基。注意： 不要使用培养时间超过 16 小时的酵母液体培养物，否则质粒 DNA 产量偏低；也不要使用超过 10mL 的酵母液体培养物，否则破壁不充分，降低质粒DNA 产量。

2.加入 1mL 自备的无菌水，充分震荡混匀，14000×g 室温离心 1 分钟，吸弃上清。

3.加入 600μL 酵母质粒 DNA 纯化溶液A，充分震荡细胞沉淀重悬，95℃保温 10 分钟。

4.14000×g 室温离心 1 分钟，弃上清液。

5.加入 250μL 含破壁酶的酵母质粒 DNA 纯化溶液 B(配制方法是将本试剂盒提供的 50mg 粉末状的破壁酶和 0.15mL RNase A 溶液全部加入到装有 13mL 酵母质粒DNA 纯化溶液 B 的塑料瓶中，轻柔摇晃混匀后使用。未用完的部分需要分装成小份然后放-20℃保存，否则破壁酶很容易失去活性)，  吹打混匀。

6.37℃保温 30 分钟，延长保温时间到 60 分钟有利于细胞壁的裂解。注意： 放置较长时间后，酵母质粒DNA 纯化溶液 B 中的裂壁酶会逐渐失活，额外再加入一些裂壁酶（如蜗牛酶、Lyticase、Zymolyase、Lywallzyme 等，总浓度为 1mg/mL）可以极大提高产量。

7.将离心管放冰浴冷却后，加入 250μL 酵母质粒 DNA 纯化溶液 C，轻轻颠倒混匀溶液蓝色将变得均匀并且溶液将变得粘稠，然后室温放置 5-10 分钟。注意：不要剧烈震荡，否则基因组 DNA 将断裂并污染质粒 DNA。

8.加入 350μL 酵母质粒 DNA 纯化溶液 D，轻轻颠倒混匀几次，溶液由蓝色变成无色，将有白色絮状沉淀产生，然后冰浴放置 10-30 分钟（如果质粒较长， 最好放置 30 分钟）。

9.14000×g 室温离心 6-10 分钟，将上清液转移到离心吸附柱中。注意：不要将漂浮在液面的沉淀物（如果有的话）转移到离心吸附柱中。上清液可以  分多次转移。

10.室温下放置至少 2 分钟以让质粒 DNA 充分结合到离心吸附柱上。

11.14000×g 室温离心 1 分钟，弃穿透液。

12.将 500μL 通用洗柱液加入离心吸附柱中，14000×g 室温离心 1 分钟，弃穿透液。

13.重复上步操作一次。

14.14000×g 室温离心 1 分钟去除离心吸附柱中残留液体。不要此步省略，否则残留洗液将影响后续的电泳、PCR 和转化实验。

15.将离心吸附柱套在一干净的 1.5mL 塑料离心管中，加入 30-100μL DNA 洗脱液（基因组纯化专用）（加入的量取决于预期的 DNA 浓度）至离心吸附柱的膜的中央。

16.室温下放置至少 2 分钟。

17.14000×g 室温离心 1 分钟以洗脱 DNA。

18.如有必要，可以再加入适量 DNA 洗脱液（基因组纯化专用）洗出残留的 DNA。第二次洗脱得到的 DNA 的产量约为第一次的 30-50%。不要将已经洗脱的、含 DNA 的溶液再加上去。

选择我们的酵母质粒DNA 纯化试剂盒（过柱法），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！