蛋白浓度测试试剂盒（Biuret 双缩脲法）一步法操作，操作简单快速，只需要 20 分钟，干扰因素少。但硫酸铵和 Tris
和某些氨基酸会干扰。

产品简介：

蛋白质定量是蛋白质研究中的一项基础性工作，有多种方法可以测定蛋白质的浓度，其中就包括 Biuret 双缩脲法。其原理是在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4 反应形成紫色络合物，其颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸组成无关，故可用来进行蛋白质定量检测。双缩脲法反应的示意图如下：

产品特点：

1.即开即用，用户只需要提供样本。

2.检测跟蛋白质分子量及氨基酸组成无关，只能浓度相关。

3.一步法操作，操作简单快速，只需要 20 分钟，干扰因素少。但硫酸铵和 Tris

和某些氨基酸会干扰。

4.该方法适用于蛋白质浓度较高的样品，尤其是动物材料。

5.起始材料可以是实体动物或植物组织、悬浮的微生物或液体样本。

6.可测的蛋白质浓度范围为 1-20 mg/mL，灵敏度较低，适合测定血液中蛋白的浓度（蛋白质浓度为 60-80 mg/mL，适当稀释后适合用本方法测定）。

7.本产品足够 50 次体积为 1 mL 比色皿检测，或 150 次体积为 300 L 的

96 孔板检测。

8.蛋白浓度测试试剂盒（Biuret 双缩脲法）只能用于科研。

产品参数：

产品规格

保存和运输

常温运输和保存，但牛血清白蛋白标准品需要低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂

蛋白提取液（不得含有硫酸铵和Tris）、蒸馏水、PBS 或生理盐水

使用方法：

一、样本蛋白提取

9.对于实体组织样本：按照组织质量（g）：自备蛋白提取液体积（mL）为 1： 5~10 的比例将组织样品加入到蛋白提取液中（0.1 g 组织需要 1 mL 蛋白提取液），冰浴匀浆，10000 rpm 4℃离心 10 分钟，取上清待测。由于动物组织的蛋白浓度常常较高，故最好预实验确定稀释多少倍后蛋白质的浓度才会在本试剂盒的线性范围。

10.对于细菌真菌样本：按照细胞数量（1E4 个）：自备蛋白提取液体积（mL） 为 500~1000：1 的比例将细胞和蛋白提取液混合（500 万细胞需要加入 1 mL 蛋白提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300 w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3 分钟），然后 8000×g 4℃离心 10 分钟，取上清置于冰上待测。

11.对于液体样品，无需进行额外处理，可直接进行后续测定步骤。

二、蛋白浓度测定（1 mL 比色皿法）

12.准备 N+2 个 1.5 mL EP 管，N 个用于待测样品、1 个用于标准品，1 个用于空白对照。

13.按下表在各管中加入各成分：

成分N 个样本管标准管空白管

双缩脲法蛋白定量溶液A各 600 μL600 μL600 μL牛血清白蛋白标准品不加300 μL不加2 mg/mL

N 个待测样本各 300 μL不加不加自备蒸馏水不加不加300 μL

总体积900 μL900 μL900 μL

14.混匀后室温静置 15 分钟。

15.测定 540 nm 处的吸光度。

三、蛋白浓度测定（0.3 mL 96 孔板酶标仪检测法）

16.在 96 孔板中的 N+2 个对应孔中，预留 N 个用于待测样品、1 个用于标准品，1 个用于空白对照。

17.按下表在各孔中加入各成分：

成分N 个样本孔标准孔空白孔

双缩脲法蛋白定量溶液A各 200 μL200 μL200 μL

牛血清白蛋白标准品

2 mg/mL不加100 μL不加

N 个待测样本各 100 μL不加不加

自备蒸馏水不加不加100 μL

总体积300 μL300 μL300 μL

18.混匀后室温静置 15 分钟。

19.测定 540 nm 处的吸光度。所得标准品光吸收四、蛋白浓度计算

20.组织样品：蛋白质浓度（mg/g 鲜重）=C 标÷(A 标－A 空)×(A 样-A 空)×V总÷W 样品

说明：C 标=标准品的浓度=2 mg/mL，A 标=标准品的光吸收值，A 空=空白管的光吸收值，A 样=样本管的光吸收值，V 总=样本总体积mL，W 样品

=样品鲜重 g。

21.细胞样品：蛋白质浓度（mg/1E4cell）=C 标÷(A 标－A 空)×(A 样－A空)×V 总÷Q 细胞相对数

22.说明：Q 细胞相对数=细胞总数/1E4

23.液体样品：蛋白质（mg/mL）=C 标÷(A 标－A 空)×(A 样－A 空)。

选择我们的蛋白浓度测试试剂盒（Biuret 双缩脲法），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！