DNA 片段加T试剂盒适用于任何平末端的 DNA 片段，包括 Pfu DNA 聚合酶等高保真 DNA 聚合酶合成的 DNA 片段或限制性内切酶酶切回收得到的 DNA 片段。

产品简介：

某些 DNA 聚合酶具有不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有 dTTP 存在的情况下，可以在平末端的 DNA 片段的两个 3’端各加上一个 dT 尾巴。本产品就是利用此原理开放的加 T 试剂盒，主要用于制备 T 载体或在平末端的 DNA 片段上加上 1 个 T 尾巴。

产品特点：

1.简单, 2X 加 T 预混合液中含有所需要的所有成分（包括酶），不需要单独准备。

2.各成分优良用量经过优化，用户不需要单独调试。

3.适用于任何平末端的 DNA 片段，包括 Pfu DNA 聚合酶等高保真 DNA 聚合酶合成的 DNA 片段或限制性内切酶酶切回收得到的 DNA 片段。

4.加 T 后的载体可以作为 T 载体使用。

产品参数：

产品规格

保存和运输

DNA 片段加T试剂盒低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

自备试剂

平末端 DNA 片段、平末端质粒 DNA、自备超纯水。

使用方法：

一：反应前纯化处理：

1.平末端 DNA 片段或平末端质粒 DNA 可以采取胶回收和酚/氯仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE 中，终浓度以 0.1 ug/uL 为宜。必须注意的是, 用 Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo 等具有 3 到 5 外切活性的 DNA 聚合酶扩增得到的 DNA 片段，必须经过彻-底的去除残留的酶的处理过程（如酚/ 氯仿抽提或 Proteinase K 处理），否则它们将在加 T 反应时，将切除掉加上的 T 尾巴，干扰反应。

2.本产品的加尾酶在 DNA 的 3’末端的核苷酸为 T 时，加 T 效率更高，故如果有可能，最好满足此要求。

二：加 T 反应

3.在干净的0.5 mL或1.5 mL离心管中，分别加入回收的DNA 片段(0.2-2 ug)、 25 uL 2 X 加 T 缓冲液、最后补水到 50 uL，在 PCR 仪上 72℃保温 2 小时。如果用金属浴或水浴，必须加 50uL 石蜡油，否则水分在反应过程中将蒸发， 影响加尾效率。

4.加 T 反应后，加尾酶将与 DNA 末端紧密结合，所以必须酚/氯仿抽提去除。如果使用 Proteinase K 处理后再用酚/氯仿抽提效果会更好。得到的 DNA溶于适量水和 TE 中后即可用于后续连接反应。由于加一个 T 不会改变 DNA

片段的琼脂糖电泳速度，故不能通过跑电泳检测加尾效果。

选择我们的DNA 片段加T试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！