免提取 LAMP 试剂盒（电泳法）操作简单，只用一步（约 5-10 分钟）即可以得到用于 LAMP 扩增的模板。

产品简介：

LAMP 即 Loop-Mediated Isothermal Amplification（环介导等温扩增），它利用 4 条模板专一的特异引物、和具有链置换能力的 Bst DNA 聚合酶 2.0

（8U/uL），在等温条件下（65℃左右） 30-60 分钟完成逆转录和 LAMP 扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于定性 PCR 技术， 同时还不需要昂贵的仪器设备。目前已成功应用于生物的快速检测，广泛用于各个领域。免提取 LAMP，即在传统 LAMP 技术的基础上，免去 DNA 步骤。

产品特点：

1.操作简单，只用一步（约 5-10 分钟）即可以得到用于 LAMP 扩增的模板。

2.即开即用，含有红色电泳示踪剂，扩增后可以直接上样，不需要上样液。

3.高特异性，精心优化的配方，非特异扩增比自配的试剂更低。

4.可以直接从几乎所有的分子生物学样品（包括细菌、真菌、植物、动物、法医样品、石蜡组织切片等）中免提取 LAMP 扩增。

5.65℃左右等温扩增，不需要贵重仪器。

6.环保健康，不使用任何有毒有害的试剂。

7.本规格足够处理 100 个样本，足够 50 次 20uL 体系的 LAMP 扩增。

产品参数：

产品规格

成份规格包装

广谱 DNA 释放剂5 mL5.0mL 绿盖管

4×LAMP MasterMix

（含电泳示踪剂，待加酶）200uL0.5mL 白盖管

Bst DNA 聚合 2.0，8U/uL50uL0.5mL 红盖管

阳性对照模板-引物混合物50uL0.5mL 蓝盖管

使用手册1 份无

保存和运输

免提取 LAMP 试剂盒（电泳法）常温运输，2-8 保存，有效期一年。

自备试剂

TE 缓冲液

使用方法：

一、LAMP 扩增模板制备

注意：如果有 N 个样品，最好设置 N+2 个样品制备，多出的两个：一个是样品制备阳性对照，一个是样品制备阴性对照。

1.在 1.5mL 或 0.5mL 的塑料管中加入 50μL 广谱 DNA 释放剂。

2.再加入 2μL 液体样品（如全血、细胞培养液等）或 2 mg（约半粒芝麻大小）

的固体样品（如动物组织、植物叶片等）。注意：固体样品用量最好不要超过 1 mg/10μL 的比例，液体样品用量最好不要超过 1μL /10μL 的比例。

3.对于液体样品，室温放置 3 分钟；对于固定样品 80℃加热 5 分钟；对难以破裂的样品（如有厚壁的真菌、石蜡切片、血斑），则保温时间可以延长到 10 分钟。得到的溶液称为样本裂解产物。

4.简短振荡混匀后取样品裂解产物立即取0.5uL 直接进行20μL体系的LAMP扩增或其他扩增。注意：加入裂解产物体积不要超过 LAMP 反应体积的1/40。

二、LAMP 扩增

5.配制 5×LAMP 引物混合液

先加超纯水将合成的 HPLC 级别的下列引物干粉稀释到下表所标注的母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水， 最后得到 1mL 的 5×LAMP 引物混合液，此混合液足够 250 次 20uL 体系的 LAMP 扩增。如果需要配制的 5×LAMP 引物混合液体积异于 1mL，则各成分的用量请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置 2 年。

注：如果没有Loop引物，则用超纯水补足其体积。

6.在冰上融化 4×LAMP MasterMix（待加酶），混匀，稍离心。第一次使用时，请将 50uL Bst DNA 聚合酶 2.0(8U/uL)全部加入到 4×LAMP MasterMix 中并轻柔混匀至少 1 分钟，然后再使用。如果有N 个样品，则在N+2 个反应管中加入以下组份，多出的一管是LAMP 扩增阳性对照（PC），一管是 LAMP 扩增阴性对照（NC）：

成份N+2 个样品管LAMP

扩增PCLAMP

扩增 NC

4×LAMP MasterMix

（加酶后）5 uL5uL5 uL

自备的 5×LAMP 引物

混合液4 uL不加4 uL

阳性对照模板-引物混合物不加4 uL不加

释放的 DNA 模板0.5 uL不加不加

补自备超纯水到20 uL20 uL20 uL

7.混匀，置于 65℃保温 60 分钟。如果是在 PCR 仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴或水浴保温，没有热盖，必须覆盖 50uL 的自备石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，会严重影响反应效率。

8.扩增结束后取 5-10uL 扩增产物直接上样（本产品含有红色电泳示踪剂，不需要再加上样液，红色示踪剂的泳动速度相当于 50bp 的 DNA）进行 2-3% 的琼脂糖凝胶电泳，有 LAMP 扩增的样品将可见 LAMP 特征性 DNA 梯度电泳图谱（见下图）：

9.结果分析：如果本试剂盒提供的阳性对照-引物混合物能够扩增而阴性对照不能扩出，则实验有效。如果阳性对照-引物混合物没有扩增出条带，则试剂盒的问题，请跟厂家联系。如果阴性对照（水作为模板）有扩增出条带， 则说明 LAMP 样品或试剂有过去的扩增产物的污染，需要注意操作的规范性，如果不能解决，可以重新设计 LAMP 引物扩增新的靶片段。

选择我们的免提取 LAMP 试剂盒（电泳法），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！