DNA 片段磷酸化试剂盒可以快速把 DNA 5′端的羟基基团变成磷酸基团，使人工合成的 DNA（包括 PCR 产物）跟天然 DNA 一样有高的连接效率。

产品简介：

人工合成的 PCR 引物、linker 和 adaptor 的 5′端一般都是羟基基团而不是磷酸基团（除非额外付费要求在人工合成时加上磷酸基团），而任何 DNA 连接酶都不能将一个 DNA 分子 5′端的羟基基团和另一个 DNA 分子 3′端的羟基基团进行连接，因此通过人工合成的 DNA 片段和天然 DNA 之间的连接效率一般都比天然 DNA 彼此的连接效率低（天然 DNA 4 个端口均可连接，人工合成的 DNA 跟天然 DNA 有 2 个端口可以连接，人工合成的 DNA 之间没有任何端口可以连接），尤其是在平末端连接时。本公司开发的 DNA 磷酸化产品能将 DNA 分子 5′端的羟基基团磷酸化。

产品特点：

1.可以快速把 DNA 5′端的羟基基团变成磷酸基团，使人工合成的 DNA（包括 PCR 产物）跟天然 DNA 一样有高的连接效率。

2.既可以对单链 DNA 进行磷酸化处理，也可以对双链 DNA 片段同时磷酸化处理。

3.处理后的 DNA 可以直接用于连接反应、克隆等，不需要纯化。

4.本产品足够 20 次 DNA 的磷酸化实验。

5.DNA 片段磷酸化试剂盒只能用于科研。

产品参数：

产品规格

成份规格包装材料

DNA 磷酸化 Mix40 μL0.5 mL 红盖管

ATP 溶液（10 mM）100 μL0.5 mL 白盖管

超纯水1 mL1.5 mL 蓝盖管

使用手册1 份1 份

保存和运输

低温运输，-20℃保存，有效期为一年。

自备试剂

引物、PCR 产物、DNA 片段

使用方法：

一：双链 DNA 片段的磷酸化

注意：如果是 PCR 产物，一定要先胶回收，不能使用没经过纯化的 PCR 反应液，因为其中残留的大量的 PCR 引物会耗掉大量的激酶，降低 PCR 产物的磷酸化效率。

1、在 1.5 mL 离心管中配制下列反应液（20 μL）：

成分用量

PCR 胶回收片段2 μL（不超过 10 pmol）

DNA 磷酸化 Mix2 μL

ATP 溶液（10 mM）5 μL

加超纯水到20 μL

2、37℃反应 30 分钟。

3、70℃热处理 5 分钟灭活 T4 多核苷酸激酶。

4、可不经过纯化直接用于后续克隆，但加入量不要超过连接反应总体积的 1/5。二：单链 DNA 片段的磷酸化

注：单链 DNA 包括局部双链的 DNA、引物，linker，adaptor，Oligo 探针等。

5、在 1.5 mL 离心管中配制下列反应液（20 μL）：

6、37℃反应 30 分钟。

7、70℃热处理 5 分钟灭活 T4 多核苷酸激酶。

8、可不经过纯化直接用于后续克隆，但加入量不要超过连接反应总体积的 1/5。如果需要提高磷酸化 DNA 的浓度，可用乙醇沉淀法浓缩 DNA（见附）。DNA 的浓度低于 5 pmol，在乙醇沉淀时还需要加入 DNA 助沉剂（需要另行购买）。沉淀得到的 DNA 可溶解在适量的水中以便得到所需的浓度。

附：乙醇沉淀浓缩 DNA(本试剂盒不提供相关试剂，下列操作流程仅供参考)：

1、在 DNA 溶液中加入 0.1 倍体积的 3 M 乙酸钠溶液（pH 5.2），100 μL DNA 溶液加 10 μL 乙酸钠溶液。

2、再加入 2.5 倍体积的无水乙醇。100 μL DNA 溶液加 250 μL 无水乙醇。

3、混匀后 12,000×g 常温离心 10 分钟，小心弃上清。

4、加入 1 mL 70%乙醇，短暂离心 3 分钟后小心弃上清。

5、短暂离心 5 秒，吸弃残留液体（约 30-50 μL）。

6、室温放置 2 分钟干燥后加入适量的超纯水溶解 DNA，立即使用或放-20℃长期保存。

选择我们的DNA 片段磷酸化试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！