植物线粒体DNA纯化试剂盒即用型试剂盒，用户不需要单独配制各种溶液或优化操作流程。

产品简介：

植物线粒体是重要的植物细胞器，负责植物细胞 ATP 的产生。此外，植物很多重要的特性(如雄性不育)也跟线粒体相关，是母系遗传研究的重要材料，因此常常需要进行线  粒体 DNA 纯化。本产品就是专门用于植物细胞线粒体 DNA 纯化的试剂盒。

产品特点：

1.即用型试剂盒，用户不需要单独配制各种溶液或优化操作流程。

2.提供粗提和精提两种操作方案。粗提只需常规台式冷冻离心机，利用差速分离原理进  行线粒体粗提，所得线粒体虽然含少量其他细胞器污染，但可用于后续的 PCR 级别的线粒体 DNA 提取。

3.精提需要冷冻超速离心（离心力达 40000×g），利用密度梯度来将粗提制备的线粒体和其他细胞成分进一步分开，得到线粒体精提液，适用于后续的测序级别的线粒体 DNA 提取。

4.本产品足够 5 次提取，每次可处理 10 g 绿色植物组织（可得 1-2.5 mg 左右线粒体） 或 20 g 非绿色植物组织（可得 2-5 mg 左右的线粒体）。

5.植物线粒体DNA纯化试剂盒只能用于科研。

产品参数：

产品规格

本试剂第一部分包装为大纸盒，常温运输和保存。

成 分 规格包装

植物线粒体提取匀浆液250 mL250 mL 本色瓶

植物线粒体提取洗涤液250 mL×2250 mL 本色瓶

植物线粒体提取离心介质150 mL250 mL 本色瓶

带柄尼龙筛1 个自有包装

软毛笔1 只无包装

Percoll50 mL60 mL 本色瓶

詹纳斯绿 B 染色液（0.2%）1 mL1.5 mL 棕色管

细胞器 DNA 纯化溶液 A3 mL5 mL 本色瓶

细胞器 DNA 纯化溶液 B0.75 mL1.5 mL 白盖管

使用手册1 份无

成 分 规格包装

BSA 干粉10 g30 mL 本色瓶

DNase A 干粉1 mg1.5 mL 蓝盖管

保存和运输

常温运输和保存, 保存期限一年。

自备试剂

超纯水、5 M KOH（调 pH 用），25 mM MgCl2 溶液、0.5 M EDTA 溶液、氯仿、异丙醇、75%乙醇、TE 缓冲液。

使用方法：

注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行，所用植物组

织，器皿和溶液均需要在 4℃预冷。任何情况下线粒体的温度都不要超过 4℃。

线粒体粗提操作流程：

1.将 10 g 的绿色植物组织（去叶脉后的嫩叶子、愈伤组织）或 20 g 干净的非绿色植物组织（如发芽组织、根、块茎等）浸泡在冰水中 10 分钟，取出用纸吸干液体后浸泡在预冷的 40 mL 匀浆液（已加 0.1% BSA）中，在浸泡状态下剪成 1 cm2 大小的碎片。注意：处理样品量太大的话线粒体产率会急剧降低，所以如果同一样品太多可分  成多组平行处理，得到线粒体粗提物后再汇集，

2.将匀浆液和其中的植物组织碎片转移到 Waring 匀浆器中，中速匀浆 3 次，每次 15秒，每次之间间隔 10 秒以便让碎片沉淀到刀片处。也可使用研磨法，具体操作是将匀浆液和其中的植物组织碎片转移到预冷的研钵中，研磨 3-4 分钟。注意：植物组织匀浆后释放的物质会使匀浆液酸化，降低 pH，而线粒体对 pH 变化非常敏感，因此建议匀浆后用 pH 试纸检测匀浆液的 pH，如果低于 7.0，必须用自备的 5 M KOH 将 pH 调到 7.0 以上才进入下一步。

3.用带柄尼龙筛过滤匀浆液，穿透液可通过预冷的漏斗收集到预冷的 50 mL 的塑料离心管中。本试剂盒提供的一个带柄尼龙筛可以洗干净后反复使用。

4.在低速固定角度冷冻离心机上 4℃ 1000×g 离心匀浆液 5 分钟，上清含线粒体，沉淀为未破碎的细胞、破碎细胞的碎片、细胞核和淀粉颗粒等。小心转移上清到新的预  冷的 50 mL 塑料离心管中。

5.将上步的离心管在水平冷冻离心机上 4℃ 12,000×g 离心 20 分钟，弃上清液，所得棕绿色沉淀即为纯化的线粒体粗提物。如果沉淀底部还有白色的淀粉沉淀，属于正  常现象。

6.在沉淀中加入 10 mL 预冷的洗涤液（已加 0.1% BSA，下同）中，用软毛笔轻柔重悬线粒体沉淀(如果最底下有白色淀粉沉淀，需要避免重悬之)。不能剧烈震荡，否则  线粒体容易破裂。本试剂盒提供的一只软毛笔可以洗干净后反复使用。

7.将线粒体重悬液转移到新的 50 mL 离心管中，再加入 30 mL 预冷的洗涤液，4℃ 1000×g 离心 5 分钟。线粒体将在上清中。

8.将上清转移到新的预冷的 50 mL 离心管中，4℃ 12000×g 离心 20 分钟，沉淀为线粒体。小心弃上清。到此步时，线粒体回收率一般在 15-30%。

9.在线粒体沉淀中加入 2 mL 预冷的洗涤液。用软毛笔轻柔重悬，得到线粒体粗提液。如果有平行提取，可将最多 4 管线粒体沉淀重悬在 2 mL 洗涤液中。线粒体粗提液中线粒体的回收率一般在 45-75%。

10.在显微镜下检测重悬液中线粒体的完整性。具体做法是先滴一滴（约 50 μL）线粒体粗提液到载玻片上，再滴入 50 μL 0.2%詹纳斯染液绿 B 染色液，混匀后 20 分钟，油镜下观察，蓝绿色颗粒状物即为线粒体。

11.所得线粒体粗提液含其他细胞器（如类囊体膜, 质体, 过氧化物酶体， 乙醛酸循环体, 或细菌）污染，但可直接用于 PCR 级线粒体 DNA 和 RNA 的提取。如果需要长期保存，则直接放-80℃保存。如此保存的线粒体 DNA 完整性在几年内都不会发生变化。

选择我们的植物线粒体DNA纯化试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！