分枝杆菌 DNA 纯化试剂盒（过柱法）操作简单，客户不需要准备额外的试剂。本产品只能用于科研。

产品简介：

分枝杆菌属（Mycobacterium）是一类极为古老的革兰氏阳性细菌属，它具有不同于别的细菌的细胞壁结构，其靠近细胞膜的部分是其他革兰氏阳性细菌都具有的肽聚糖层， 该层通过磷酸二酯键与分枝酸-阿拉伯半乳糖-肽聚糖复合层共价连接。分枝酸是含 70～90 个碳原子的枝链脂肪酸，位于 MAPc 的外层，分枝杆菌因此而得名。MAPc 层之外为糖化脂质层（glycolipid），它与分枝酸相连，成分主要是磷脂，占细胞壁干重的比例高达 60%，所以分枝杆菌疏水性很强，不能使用革兰氏染色。分枝杆菌细胞壁还含有贯穿整个细胞壁的脂阿拉伯糖甘露聚糖，它是一种含阿拉伯糖和甘露糖的磷酸化的、不均一混合物，其末段所连接的成分的不同与细菌对巨噬细胞反应的不同密切相关。分枝杆菌细胞壁的上述特点使得用常规方法纯化其 DNA 非常困难。本产品就是为解决这一问题而开发的产品。

产品特点：

1.       操作简单，客户不需要准备额外的试剂。

2.       适用于整个分枝杆菌属。

3.       获得的基因组 DNA 足够进行后续的核酸扩增或酶切处理。PCR 检测灵敏度一般在10-100 CFU/mL 样品。

4.       既可以使用培养的分枝杆菌，也可以使用从痰液、精液、血液、脑脊液等样品中分离的分枝杆菌。

5.       安全无毒，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。

6.       本产品足够 50 次分枝杆菌 DNA 的纯化实验。

7.       分枝杆菌 DNA 纯化试剂盒（过柱法）只能用于科研。

产品参数：

成份规格包装

分枝杆菌 DNA 纯化溶液 A7.5 mL10 mL 本色瓶

分枝杆菌 DNA 纯化溶液 B15 mL15 mL 棕玻瓶

分枝杆菌 DNA 提取溶液 C30 mL30 mL 本色瓶

化痰液成分（干粉）5 g10 mL 本色瓶

离心吸附柱50 套塑料袋

通用洗柱液50 mL60 mL 本色瓶

DNA 洗脱液（基因组纯化专用）10 mL10 mL 本色瓶

使用手册1 份1 份

保存和运输

常温运输，但化痰液成分（干粉）和分枝杆菌 DNA 纯化溶液 B 需要 4℃保存，有效期一年。

自备试剂

TE 缓冲液，氯仿。

使用方法：

注意：文献报道部分分枝杆菌在 DNA 提取过程中还有形成菌落的能力，所以任何丢弃的溶液都必须按有传染性的污染物品对待，并严格按有关要求进行消毒处理。

一: 培养的分枝杆菌样品的预处理

1.刮取培养皿培养的分枝杆菌到 0.5 mL 自备 TE 缓冲液中。

2.80℃放置 20 分钟以杀灭分枝杆菌。

3.3,000× g 室温离心 15 分钟，弃上清。

4.将分枝杆菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入到第四步的分枝杆菌基因组 DNA 提取步骤。

二: 含分枝杆菌的痰液样品的预处理

1.将痰液样品(0.5 mL-2 mL)加入到干净的 10 mL 或 15 mL 塑料离心管中。

2.加 2 mL 的自备蒸馏水，再加入 100 mg 化痰液干粉，充分混合均匀后室温放置 15-30 分钟。如果痰很浓，可以延长保温时间 30 分钟。

3.3,000×g 室温离心 15 分钟，弃上清。

4.将分枝杆菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入到第四步的分枝杆菌基因组 DNA 提取步骤。

三: 含分枝杆菌的血液样品的预处理

1.用自备红细胞裂解液对血液进行红细胞裂解处理（可另购本公司红细胞裂解液产品）。

2.将得到的白细胞沉淀放-20℃或更低温度放置 10 分钟。

3.迅速将得到的白细胞沉淀 100℃加热 10 分钟。

4.上述处理将使大部分白细胞破裂，加入自备的 TE 到离心管体积的一半位置。此步使白细胞的 DNA 进入缓冲液中。

5.离心 5-10 分钟沉淀分枝杆菌，离心速度取决于离心管的大小。如果样品在 1.5 mL 离心管，则可以 12,000-15,000×g 室温离心。如果样品在 10-15 mL 离心管，则3,000-5,000×g 室温离心。

6.吸弃上清(含白细胞 DNA)，将所得分枝杆菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入到第四步的分枝杆菌基因组 DNA 提取步骤。

四: 分枝杆菌基因组 DNA 的提取

1.将 150 μL 65℃预热过的分枝杆菌DNA 纯化溶液A 加到有分枝杆菌沉淀的螺旋盖离心管中，充分震荡混匀。

2.将混合物转移到一个干净的 1.5 mL 塑料螺旋盖离心管中。强烈建议不要使用压盖式塑料离心管，否则后面处理过程溶液容易漏出。

3.加入 300 μL 分枝杆菌 DNA 纯化溶液 B 和 300 μL 自备氯仿，充分震荡混匀。

4.-20℃放置直到液体凝固，一般需要 30 分钟。过夜放置也可。也可以-80℃放置 10 分钟直到液体凝固。

5.放室温融化后振荡半分钟。

6.12,000-15,000× g 室温离心 3-5 分钟，小心转移全部上清到一个新离心管中。

7.加入等体积的分枝杆菌 DNA 纯化溶液 C，颠倒混匀。

8.将液体转移到离心吸附柱中，室温放置 2 分钟。 9. 12,000-15,000×g 室温离心半分钟，弃穿透液。

10.加入 0.5 mL 通用洗柱液 12,000-15,000×g 室温离心半分钟，弃穿透液。

11.重复上步的洗涤过程一次。

12.短暂离心半分钟。此步不要省略，否则残留的洗柱液（含乙醇）将会影响 DNA 电泳、酶切和 PCR 等反应。

13.将离心吸附柱转移到一新的离心管中，加入 50 μL DNA 洗脱液（基因组纯化专用）， 12,000-15,000×g 室温离心半分钟，所得溶液即分枝杆菌基因组 DNA。

14.直接取 5-10 μL 电泳检测 DNA，其余放冰箱备用或用于后续反应。

选择我们的分枝杆菌 DNA 纯化试剂盒（过柱法），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！