DNA去磷酸化试剂盒模板可以是单链 DNA，也可以是双链 DNA；既可以是平末端，也可以是 5′ 端突出或 3′端突出的粘性末端。

产品简介：

本产品是基于碱性磷酸酶的核酸去磷酸试剂盒。

产品特点：

1.可以去除 DNA、RNA 和 dNTP 的磷酸基团。

2.用于克隆载体去磷酸化时，可以有效防止载体自连。

3.可用于测序或 SNP 分析前除去 PCR 反应中 dNTP 和焦磷酸盐。

4.T4 PNK 标记 5´ DNA 末端前，用来去除 DNA 靶分子的磷酸基团。

5.模板可以是单链 DNA，也可以是双链 DNA；既可以是平末端，也可以是 5′ 端突出或 3′端突出的粘性末端。

6.在几乎所有限制性内切酶反应缓冲液中均有活性，故可以跟限制性内切酶酶切  反应同步进行，减少操作步骤。

7.去磷酸化处理后的反应液不需要纯化，灭活酶后可直接用于后续的连接反应和  标记反应。

8.65℃15 分钟的热处理可以使酶不可逆地彻-底灭活，不用担心残留的活性影响后续的实验。

9.本产品足够 20 次 20 μL 体系的去磷酸化实验。

10.DNA去磷酸化试剂盒仅供科研使用。

产品参数：

成份规格包装

10×去磷酸化缓冲液50 μL0.5 mL 蓝盖管

细菌碱性磷酸酶20 μL0.5 mL 紫盖管

超纯水1 mL1.5 mL 本色管

使用手册1 份无

运输及保存

低温运输，-20℃保存，有效期为 12 个月。

自备试剂

DNA 片段

使用方法：

特别注意：

由于 dNTP 和 ATP 也是细菌碱性磷酸酶的底物，所以如果 DNA 溶液中含有大量的 dNTP（比如 PCR 产物中）或 ATP，而目的是去除 DNA 溶液的磷酸基团， 最好先将其去除，否则它们会耗掉大量的细菌碱性磷酸酶活性，降低 DNA 去磷酸化效率。

一、去磷酸化反应（以纯化德 DNA 片段为例）

1、在微量离心管中配制下列反应液（20 μL）：

成分用量

胶回收的 DNA 片段1 pmo（l 相当于 1 ug 3Kb 的线状质粒）

10×去磷酸缓冲液2 μL

细菌碱性磷酸酶0.5 μL

超纯水到20 μL

2、建议在 37℃反应 30 分钟（对平末端、5′端突出或 3′端突出的 DNA 片段均采用此保温条件）。

3、65℃反应 15 分钟变性细菌碱性磷酸酶。

4、DNA 片段可以直接用于连接。

二、限制性酶切反应中的同步去磷酸化

5、本细菌碱性磷酸酶在几乎所有限制性内切酶的缓冲液中都有活性，故所以可以按 1 ug 3 Kb 长度的 DNA 加 1 μL 细菌碱性磷酸酶的比例（对应的是 DNA末端数量）直接加到限制性内切酶的反应液中。反应液中最好不含 dNTP 和ATP。

6、加热灭活限制性内切酶和细菌碱性磷酸酶（灭活条件根据限制性内切酶不同而不同，但不能低于 65℃，时间不能短于 15 分钟，否则不能灭活细菌碱性磷酸酶）。灭活后的样品可以直接用于后续实验。

7、如果不能采取加热灭活限制性内切酶和细菌碱性磷酸酶，则需酚/氯仿抽提去除酶。具体操作如下(本试剂盒不提供相关试剂，需要从本公司另购相关试剂，  下列操作仅供参考)：

附：酚/氯仿抽提去除酶步骤：

1、在反应液中加入超纯水使体积变成 100 μL，以免纯化过程中 DNA 丢失。如果有必须，可以加入和 4 μL 核酸助沉剂提高回收效率。

2、加入 100 μL 酚/氯仿/异戊醇 25 ：24 ：1 混合液震荡半分钟混匀，室温12000×g 心管中。离心 3 分钟，转移上清到新离心管中。

3、加 0.1 倍体积（即 10 μL）的 3 M 乙酸钠溶液（pH 5.2）。

4、再加入 2.5 倍体积（即 250 μL）的无水乙醇。

5、混匀后 12000×g 4℃离心 10 分钟，小心弃上清。

6、加入 1 mL 70%乙醇，短暂离心 3 分钟后小心弃上清。

7、短暂离心 5 秒，吸弃残留液体（约 30-50 μL）。

8、室温放置 2 分钟干燥后加入适量的超纯水溶解 DNA，立即使用或放-20℃长期保存。

选择我们的DNA去磷酸化试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！