逆转录试剂盒使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低，使得在逆转录过程中 RNA 模板不容易被降解，得到的 cDNA 平均长度更长。

产品简介：

本试剂盒提供合成 cDNA 第一链（逆转录）所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLV RT）以 RNA 为模板，高效合成 cDNA。

产品特点：

1.使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低，使得在逆转录过程中 RNA 模板不容易被降解，得到的 cDNA 平均长度更长。

2.最长可合成 13 Kb 的 cDNA。

3.可以使用 oligo-dT、随机引物和 RNA 专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提供）。

4.总 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作为模板。

5.得到的 cDNA 可用于后续的 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

6.本产品足够 50 次 20 L 体系的逆转录反应。

7.逆转录试剂盒只能用于科研。

产品参数：

产品规格

50次

运输及保存

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂

无

使用方法：

一：合成 PCR 用的 1st-strand cDNA

1. 在一干净的反应管中加入RNA 模板。注意：RNA 模板不能含有基因组 DNA 污

染。

RNA 模板种类加入量

总 RNA100-500 ng

或 poly(A) mRNA10-500 ng

 或专一的 RNA

2.加入引物和水

0.01 pg-500 ng

引物种类加入量

Oligo (dT)12-18，0.5 g/L1 L

或随机引物(6 碱基，无-修饰)，

0.2 g/L1 L

或 RNA 模板专一性引物15-20 pmol

注意：随机引物与 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平

均长度成反比。

3.加水到 13 L 。

4.70℃保温 5 分钟后立即冰浴，此步可以打开 RNA 的二级结构。

5.再加入 5 L 4×RT Buffer（含 dNTP）。

6.37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保温 5 分钟。但如果使用随机引物，由于其很短，则改成 25℃ 5 分钟以便其跟RNA 结合。

7.加入 1 L MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20 L。

8.42℃保温 60 分钟。但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，待合成了一段 cDNA 后，然后再转移到 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。

9.70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为PCR 模板使用，不需要纯化。

二：合成建文库用的 1st-strand cDNA

1.在一干净的反应管中加入RNA 模板。注意：RNA 模板不能含有基因组 DNA 污染。

2.加入引物

引物种类加入量

Oligo (dT)12-18，0.5 g/L1 L

或随机引物(6 碱基，无-修饰)

0.2 g/L1 L

或 RNA 模板专一性引物100 pmol

注意：随机引物与 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均长度成反比。

3.加水到 13 L。

4.70℃保温 5 分钟后立即冰浴，此步可以打开 RNA 的二级结构。

5.再加入 5 L 4×RT Buffer（含 dNTP）。

6.37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保温 5

分钟。如果使用随机引物，则改成 25℃ 5 分钟。

7.加入 2 L MMLV 逆转录酶（含 RI），反应终体积为 20 L。

8.42℃保温 60 分钟，但如果使用随机引物，需要先 25℃保温 10 分钟，然后再转移到 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。

9.70℃保温 10 分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃长期保存。

选择我们的逆转录试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！