昆虫RNA纯化试剂盒（过柱法）适用于各种昆虫组织，每 100mg 组织能提取到 20-30 μg 总 RNA。

产品简介：

昆虫RNA纯化试剂盒（过柱法）是专门用于从富含多糖、糖蛋白、粘蛋白的动物样品（尤其是昆虫样品） 中提取总 RNA 的试剂。

产品特点：

1.操作简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。

2.RNA 纯度高，平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右，能够有效去除大多数昆虫中的多糖污染。

3.适用于各种昆虫组织，每 100mg 组织能提取到 20-30 μg 总 RNA。

4.得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、cDNA 合成等实验。

5.一站式，提供 RNase-free 的样品收集管。

产品参数：

成份规格包装材料

昆虫 RNA 纯化溶液 A50 mL60 mL 本色瓶

昆虫 RNA 纯化溶液 B15 mL15 mL 棕玻瓶

昆虫 RNA 纯化溶液 C50 mL60 mL 本色瓶

离心吸附柱50 套塑料袋

通用洗柱液50 mL60 mL 本色瓶

RNA 洗脱液10 mL10 mL 本色瓶

使用手册1 份1 份

运输及保存

常温运输和保存，昆虫 RNA 纯化溶液 B 最好放 4℃长期保存，有效期一年。

自备试剂

氯仿。

使用方法：

1.将 50-300 mg 昆虫组织放入 10-15 mL 塑料离心管中，加入 1 mL 昆虫 RNA 纯化溶液 A，然后用匀浆器匀浆 5-20 秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎昆虫组织，砚磨完后加入 1 mL 昆虫 RNA 纯化溶液 A。注意：溶解昆虫 RNA 纯化溶液 A 沉淀。昆虫 RNA 纯化溶液 A 在 4℃ 放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻-底溶解并充分摇匀后再取用。

2.将匀浆物或砚磨物转移至干净的 1.5 mL 塑料离心管中（可以不必转移非液体的细胞碎片）。

3.在离心管中加入 0.3 mL 的昆虫 RNA 纯化溶液 B 和 0.2 mL 自备氯仿，在振荡器上振荡 30 秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。

4.室温 12,000 rmp 离心 3-5 分钟，两相间将有约 5-10 毫米厚的细胞破碎物。

5.将上清液（约 0.6 mL）转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中，下层有机相和中间层含有 DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下 100 μL上清液不取。

6.加入等体积的昆虫 RNA 纯化溶液 C，充分颠倒混匀。

7.将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12,000 rmp 室温离心半分钟，弃穿透液。

8.将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12,000 rmp 室温离心半分钟，弃穿透液。

9.加 0.7 mL 通用洗柱液，室温 12,000 rmp 离心半分钟，弃穿透液。

10.加 0.3 mL 通用洗柱液，室温 12,000 rmp 离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。

11.室温 12,000 rmp 离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。

12.将离心吸附柱转移到 RNase-free 收集管中，加入 50-100 μL RNA 洗脱液，室温放置 1-2 分钟。

13.12,000 rmp 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

14.RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变 性 胶 进 行 RNA 电 泳 ， 因 为 非 变 性 胶 不 能 分 离 所 有 的 RNA 分 子

（BioTechniques，28：414，2000）。注意：大部分昆虫的 28S RNA 被切

割成两个小的片段，彼此用氢键相连，所以在甲醛变性胶中，没有 28S 带出现

（文献见：Eva C. Winnebeck，Craig D. Millar and Guy R. Warman，Why does insect RNA look degraded? Journal of Insect Science: Vol. 10：1-7）

15.RNA 产量产率测定：将 5-10 μLRNA 溶于 TE 缓冲液中（pH 7.5-8.2 之间）检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260 的RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度 X 体积）和产率（RNA 产量/组织用量）。

16.RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间（具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关），高于此范围则分别表示样品  可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。

选择我们的昆虫RNA纯化试剂盒（过柱法），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！