猴端粒长度检测试剂盒(染料法 qPCR)可以被用于动物细胞和组织等样本端粒长度的定量检测。

产品简介：

端粒是位于染色体末端的重复TTAGGG 序列和核蛋白的复合物，在维持细胞增 殖和保持基因组完整性方面起着至关重要的作用。由于端粒区域复制不完-全和成体细胞中端粒酶 TERT 的低活性，增殖体细胞中的端粒长度随着年龄的增长而逐渐缩短。端粒长度的缩短导致细胞周期停滞，细胞衰老和体细胞凋亡。端粒长度的维持，使癌细胞逃脱端粒介导的细胞死亡途径，是与癌症标志相关的一个特征。

本产品通过荧光定量 PCR 技术，使用 SYBR 绿色荧光染料，作为 DNA 结合染料，和扩增子上双链 DNA 的任一小沟结合，而发出荧光信号。根据每一循环的荧光强度来确定扩增产物的产量，并用循环阈值（threshold cycle；Ct）表示，由此定量测定猴端粒基因扩增产量（Ct）和参考基因 36B4 单拷贝基因扩增产量（Ct），与相应的端粒长度和基因拷贝标准曲线，进行对照测算，来确定猴基因组的端粒长度。

产品特点：

1.操作简便易行。

2.本试剂盒足够 20 个样本的探针法荧光定量PCR 反应。

3.本试剂盒运用 SYBR 绿色荧光染料作为标记信号。

4.产品即到即用，性能稳定，无核酶污染，敏感高效，定量准确，重复性强。

5.可以被用于动物细胞和组织等样本端粒长度的定量检测。

6.猴端粒长度检测试剂盒(染料法 qPCR)只能用于科研，不能用于临床。

产品参数：

成分规格包装

猴端粒长度检测反应液××微升本色管

猴端粒长度检测染色液××微升本色管

猴端粒长度检测标准端粒液××微升本色管

猴端粒长度检测标准内参液××微升本色管

猴端粒长度检测端粒引物液××微升本色管

猴端粒长度检测端粒

内参引物液××微升本色管

猴端粒长度检测补充液××毫升本色瓶

猴端粒长度检测封隔液××毫升本色瓶

使用手册1 份无

运输及保存

低温运输，-20℃避光保存，有效期半年。

自备试剂

台式离心机，1.5 毫升离心管，PCR 管，荧光定量PCR 仪 。

使用方法：

一、标准端粒样品制备

1.准备好 7 个无菌的 1.5 毫升离心管，标记为T1 至 T5 号管

2.按下表分别加入××微升的猴端粒长度检测补充液到 T2 至T5 管。

3.移取××微升猴端粒长度检测标准端粒液到 T1 号管。

4.小心移取××微升 T1 号管的猴端粒长度检测标准端粒液到T2 号管，混匀。

5.小心移取××微升 T2 号管稀释的猴端粒长度检测标准端粒液到T3 号管，混匀。

6.小心移取××微升 T3 号管稀释的猴端粒长度检测标准端粒液到T4 号管，混匀。

7.以此类推。

8.将 T1 至T5 号管放进冰槽里备用；标准管浓度见下表

管号猴端粒长度检测补充液猴端粒长度检测标准端粒液标准端粒长度

T1——××微升1.18 × 108Kb

T2××微升××微升 1 号管1.18 × 107 Kb

T3××微升××微升 2 号管1.18 × 106 Kb

T4××微升××微升 3 号管1.18 × 105 Kb T5××微升空白对照空白对照

二、标准参考基因样品制备

9.准备好 7 个无菌的 1.5 毫升离心管，标记为 S1 至 S6 号管。

10.按下表分别加入××微升的猴端粒长度检测补充液到 S2 至 S6 管。

11.移取××微升猴端粒长度检测标准内参液到 S1 号管。

12.小心移取××微升 S1 号管的猴端粒长度检测标准内参液到 S2 号管，混匀。

13.小心移取××微升 S2 号管稀释的猴端粒长度检测标准内参液到 S3 号管，混匀。

14.小心移取××微升 S3 号管稀释的猴端粒长度检测标准内参液到 S4 号管，混匀。

15.以此类推。

16.将 S1 至 S6 号管放进冰槽里备用；标准管浓度见下表

管号猴端粒长度检测

补充液猴端粒长度检测

标准内参液标准参考基因拷贝数

S1——××微升2.63 ×109 拷贝数/基因组

S2××微升××微升 1 号管2.63 ×108 拷贝数/基因组

S3××微升××微升 2 号管2.63 ×107 拷贝数/基因组

S 4××微升××微升 3 号管2.63 ×106 拷贝数/基因组

S5××微升××微升 4 号管2.63 ×105 拷贝数/基因组

S6××微升空白对照空白对照

三、 定量检测

17.准备好纯化的待测 DNA 样品。

18.进行 DNA 定量测定。

19.准备好 PCR 管，并标记为标准端粒管、标准内参管、待测样品端粒管、待测样品内参管、端粒阴性对照管和内参阴性对照管。

20.每管PCR 反应总量为 20 微升。

21.分别移取×微升猴端粒长度检测反应液到所有管里。

22.分别加入××微升待测 DNA 模板（总 20 纳克）到待测样品端粒管和待测样品内参管里。

23.分别加入××微升猴端粒长度检测补充液到端粒阴性对照管和内参阴性对照管里。

24.分别加入4××升上述配制的系列猴端粒长度检测标准端粒液和猴端粒长度检测标准内参液到相应的标准端粒管和标准内参管里。（注意：各选取 4 个点（105 至 108）即可）

25.分别加入××微升猴端粒长度检测端粒引物液到标准端粒管、待测样品端粒管和端粒阴性对照管里。

26.分别加入××微升猴端粒长度检测内参引物液到标准内参管、待测样品内参管和内参阴性对照管里。

27.分别加入××微升猴端粒长度检测染色液到所有管里。

28.分别加入××微升猴端粒长度检测补充液到所有管里。

29.放进 4℃微型台式离心机瞬时离心 5 秒。

30.使用××微升枪头分别加入 1 滴猴端粒长度检测封隔液到所有管里。

31.即刻放进荧光定量PCR 仪。

32.荧光定量PCR 反应程序为。

温度（℃）时间循环

955 分钟1

95

60

7230 秒

30 秒

30 秒

40

33.进行数据分析

（1）采集数据，进行扩增曲线分析。（退火温度进行荧光信号采集）

（2）获得所有样品的 Ct 值。

（3）分别构建端粒长度和基因组拷贝数标准曲线：纵座标（Y 轴）为 Ct 值；横座标（X 轴）。为对数标准端粒长度（Kb）或对数标准基因组拷贝数。

（4）根据标准曲线获得样品对应端粒长度（Kb）或基因组拷贝数。

（5）计算样品实际端粒长度（Kb）/基因组：

实际总端粒长度（Kb）/基因组=样品总端粒长度（Kb）÷样品基因组拷贝数

选择我们的猴端粒长度检测试剂盒(染料法 qPCR)，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！