玉米赤霉烯酮（ZEN）ELISA试剂盒可定性、定量检测血清，尿液，饲料及饲料原料，土壤，微生物，鸡蛋，玉米、小麦以及副产物等样本中的玉米赤霉烯酮（ZEN）。

玉米赤霉烯酮（ZEN）ELISA试剂盒

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6个月

实验原理

本试剂盒采用竞争ELISA方法，在微孔板包被有玉米赤霉烯酮（ZEN）偶联抗原，加入玉米赤霉烯酮（ZEN）标准品或样品，游离玉米赤霉烯酮（ZEN）与微孔条上预包被的玉米赤霉烯酮（ZEN）偶联抗原互相竞争抗玉米赤霉烯酮（ZEN）抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中玉米赤霉烯酮（ZEN）含量成反比，通过标准曲线计算样品中玉米赤霉烯酮（ZEN）的含量。  

试剂盒组成

预包被的玉米赤霉烯酮（ZEN）偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。

玉米赤霉烯酮（ZEN）标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是： 0 ng/ml，0.5 ng/ml,2 ng/ml,20 ng/ml,200 ng/ml,400 ng/ml。

抗玉米赤霉烯酮（ZEN）抗体酶结合物：1瓶（6ml）。

显色液A：1瓶（6ml）。

显色液B：1瓶（6ml）。

终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。

样本-稀释液：1瓶（10×,  6ml），用于样品稀释用。

浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。

说明书一份。

操作步骤

实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（25±2℃），时间约2小时。回温至室温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存

注：一定保证回温充分，否则影响检测的精确度和准确度。

使用后请立即将试剂放回2~8℃保存

请不要改变分析程序

请使用精确的微量移液器

操作一旦开始，请不要中断任何程序

ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作

为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样

加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面

分析步骤

预先进行编号，标记B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测

取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存

样品稀释液（10×）、浓缩洗涤液（20×）稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)

在B0孔中加入50µl   0.0 ng/ ml标准品溶液

在各标准孔中加入50μl的标准品溶液

在各样品孔中加入50µl样品溶液

在所有孔中加入50µl的抗玉米赤霉烯酮（ZEN）抗体酶结合物

轻轻晃动反应板几秒钟。 

37℃温浴30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）

甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，最后一次应在吸水纸上拍打以完-全除去孔中液体。

反应

洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl显色液A，再加 50µl显色液B；轻微晃动反应板使之彻-底混匀

37℃温浴10min

每孔中加入50µl终止液，混匀

在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。

结果计算

定量分析

所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B0—0 ng/ml标准溶液的平均吸光度值

以玉米赤霉烯酮（ZEN）浓度的对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为玉米赤霉烯酮（ZEN）浓度的对数值，求得反对数即为测定液中玉米赤霉烯酮（ZEN）浓度C（ppb）

由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。 

半定量测定

目测半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品吸光度值的高低比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

仪器半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品颜色深浅比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

特异性

物质 交叉反应

玉米赤霉烯酮………………………………………100%

玉米赤霉酮…………………………………………13%

玉米赤霉醇…………………………………………＜1%

试剂盒参数

本试剂盒检测下限为0.05ng/ml

B0吸光度最佳值应大于1.0

试剂盒吸光度板内误差小于8％，板间误差小于15％。

用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80％。

试剂盒提供的标准曲线范围为0 ng/ml ~ 400ng/ml。

分析限制

玉米赤霉烯酮（ZEN）ELISA试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。