猪乙型脑炎病毒 ELISA 抗体检测试剂盒由包被猪乙型脑炎病毒蛋白的微孔板和酶标羊抗猪 IgG 及其他试 剂组成，应用酶联免疫间接法原理（ELISA）检测猪血清或血浆中猪乙型 脑炎病毒抗体。

猪乙型脑炎病毒 ELISA 抗体检测试剂盒

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：12个月

使用意义

猪乙型脑炎间接 ELISA 抗体检测试剂盒用于检测猪血清中猪乙型脑炎 病毒抗体。

试剂盒组成

规格96 份/盒192 份/盒480 份/盒

JEV 抗原包被板96 孔/块×196 孔/块×296 孔/块×5

样品稀释液30ml/瓶×160ml/瓶×1120ml/瓶×1

酶标记物(JEV)11ml/瓶×122ml/瓶×150ml/瓶×1

阳性对照血清(JEV)1.5ml/瓶×11.5ml/瓶×14ml/瓶×1

阴性对照血清(JEV)1.5ml/瓶×11.5ml/瓶×14ml/瓶×1

底物 A 液6ml/瓶×112ml/瓶×130ml/瓶×1

底物 B 液6ml/瓶×112ml/瓶×130ml/瓶×1

终止液6ml/瓶×112ml/瓶×130ml/瓶×1

20×浓缩洗涤液30ml/瓶×150ml/瓶×1100ml/瓶×1

封板膜1 张2 张5 张

自封袋1 个2 个5 个

说明书1 份1 份1 份

操作步骤：

1. 使用前将试剂盒置于室温 30 分钟，待其恢复至室温。(注： 阴、阳对照 血清不用回温，从 4℃取出，即可使用，使用后立即放回 4℃保存)

2. 取所需用量的 JEV 抗原包被板条，设阴性及阳性对照各 2 孔，未用的板 条尽快密封，2~8℃保存。

3. 阴性、阳性对照孔分别加入阴性、阳性对照血清 100μL；样品孔每孔加 入稀释后的血清样本 100μL。

4. 轻微振荡混匀；盖上封板膜封板，置于 37℃环境避光反应 30 分钟。

5. 洗板：小心揭开封板膜，将孔内液体甩干，加洗涤液 300μL/孔，每次浸 泡 1min ，充分洗涤 4~5 次，最后一次用吸水纸拍干。

6. 每孔加酶标记物 100μL 。37℃环境避光反应 30 分钟。

7. 洗板： 同步骤 5。

8. 显色：每孔先各加入底物 A 液 50μL ，再各加入底物 B 液 50μL ，轻轻振 荡混匀，并在 37℃下避光反应 15 分钟。

9. 读数： 每孔各加 50μL 终止液，在酶标仪于 450nm 处测定 OD 值（在 5 分钟内读完数据）。

结果判定

成立条件：

阴性对照： 阴性对照孔 OD 均值≤ 0.1；

阳性对照：阳性对照孔 OD 均 值≥0.5；

计算方法：S/P 值=样本 OD 值/阳性对照 OD 平均值

结果判定：S/P 值＜0.3 则判断为阴性；S/P 值≥0.3 则判断为阳性。

注意事项

1. 操作时必须戴手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。

2. 采集血清时应无菌操作，要求血清清亮无溶血，避免使用严重溶血的血 清。

3. 用于检测的样品应保持新鲜血清保存时间不能太久，血清解冻后应该充 分混匀，血清稀释后在加样前也要混合均匀，解冻后的血清争取一次性 检测完毕，如需做多次检测，建议少量分装冷冻保存。

4. 若血清出现浑浊或沉淀，建议离心后取上清检测。

5. 试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

6. 试验中常用到的酶标仪、加样器、洗板机、恒温箱及存放试剂的冰箱等 仪器设备要定期维护和校准，确保仪器设备正常使用，避免试验误差。

7. 所有样品洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

8. 微孔板从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽后方可，未用完 的微孔板须放入有干燥剂的密封袋中保存。

9. 剩余样品及废弃物应经 121℃高压蒸汽灭菌 30 分钟，或用 5.0g/L 次氯酸 钠等消毒剂处理 30 分钟后废弃。

10. 猪乙型脑炎病毒 ELISA 抗体检测试剂盒不同批号试剂组分不得混用。