改良Bradford法蛋白定量试剂盒不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达 1M，二硫苏糖醇的浓度可高达 5mM。

产品简介：

Bradford 法测定蛋白质浓度是最为常用的蛋白检测方法之一，在酸性条件下，考马斯亮蓝（Coomassie G-250）染料能与蛋白质结合形成复合物，其最大吸光值也由 465nm 转移到 595nm，通过颜色的强弱即可测定蛋白质浓度的高低。SDS-PAGE 电泳凝胶是蛋白电泳的常用凝胶系统，为适配该系统，本品在经典 Bradford 法基础上做了改进，使得改良 Bradford 法与 SDS-PAGE 上样液兼容。

产品特点：

1.与 SDS-PAGE 上样液兼容。

2.快速，10-20 个样品只需要 10 分钟即可完成测定。

3.稳定，加样混匀后 2 分钟既可测定，1 小时内吸光度变化不超过 10%。

4.线性范围在 50～1000µg/mL。

5.最小测量体积为 1-20µL，最-低测量蛋白量为 0.5µg。

6.即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。

7.有常规和微量两种检测模式。

8.不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达 1M，二硫苏糖醇的浓度可高达 5mM。

9.受略高浓度的表面活性剂影响，各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。

10.本产品至少可以按常规法测 200 次，按微量法测 1000 次。

11. 本产品只能用于科研。

产品参数：

产品规格

保存和运输

常温运输及保存，有效期一年。

自备试剂

超纯水、分光光度计、定性滤纸

使用方法：

一、制备溶液 A 工作液

1.将试剂盒提供的 Bradford 法蛋白定量溶液 A 与自备超纯水按 1：4 比例充分混合即为溶液 A 工作液(例：4mL 溶液 A+16mL 超纯水=20mL 溶液 A 工作液)。每次配制多少取决于检测方法和测试体积，需要预先按下面手册计算。

2.用本试剂盒提供的滤纸过滤溶液 A 工作液。过滤后的工作液室温条件下可稳定使用 1-2 星期。注意：不同型号、规格的滤纸，具有不同的孔径，导致可通过的分子各不相同。请使用本公司指-定提供的滤纸，否则会导致不同的测  定结果。

二、制备 BSA 标准品梯度稀释液

3.测试开始之前，应首先制备 BSA 标准品梯度稀释液。本试剂盒使用 BSA 作为标准品。用户也可以使用自备的其他蛋白质浓度测定用标准品。每个浓度  具体需要多少体积取决于检测方法和测试体积，需要预先按下面的手册计  算。没有用完的 BSA 标准品梯度稀释液可以放-20℃待下次使用。

如果进行常规检测，建议用溶解待测样品的缓冲液将 BSA（2mg/mL）稀释成下面的 8 个浓度：

0µg/mL、31.25µg/mL、62.5µg/mL、125µg/mL、250µg/mL、 500µg/mL、750µg/mL、1000µg/mL

如果进行微量检测，建议用溶解待测样品的缓冲液将 BSA（2mg/mL） 稀释成下面的 6 个浓度：

0µg/mL、2.5µg/mL、5µg/mL、7.5µg/mL、10µg/mL、20µg/mL。

三、常规检测流程

常规检测法在蛋白浓度30-1000µg/mL 范围内呈现R2=0.996 的直线线性

回归，可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。

4.在标记的离心管中分别加入 N 个待测蛋白样品和 8 个 BSA 梯度稀释液，然后再在每个离心管中按 1:50 的比例加入溶液 A 工作液。终体积多少取决于比色杯的体积。

如果用 3mL 比色杯检测，则取 100µL 样品+5mL 溶液 A 工作液； 如果用 1mL 比色杯检测，则取 40µL 样品+2mL 溶液 A 工作液； 如果用平底透明 96 孔板，则取 20µL 样品+1mL 溶液 A 工作液。

5.样品与溶液 A 工作液混合后，充分震荡 30 秒混匀。

6.室温放置 5 分钟。

7.分光光度计检测吸光度。波长设定=595nm。用 96 孔板测定时，应确保没有气泡，否则气泡会绝对增加吸光度的读数。

8.将待测样品的测定值逐一跟用 BSA 梯度稀释液测定值绘制的标准曲线比较得到待测样品的蛋白质浓度。

四、微量检测流程

此方法在蛋白浓度 1～20µg/mL 范围内呈现 R2=0.992 的直线线性回归，可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。

9.在标记的离心管中分别加入 N 个待测蛋白样品和 6 个 BSA 梯度稀释液，然后再在每个离心管中按 4:1 的比例（注意：不是 1:50）加入溶液 A 工作液。终体积多少取决于比色杯的体积。

如果用 3mL 比色杯检测，则取 4mL 样品+1mL 溶液 A 工作液； 如果用 1mL 比色杯检测，则取 2mL 样品+0.5mL 溶液 A 工作液；

10.如果用平底透明 96 孔板，则取 400µL 样品+100µL 溶液 A 工作液。样品与溶液 A 工作液混合后，充分震荡 30 秒混匀。

11.室温放置 5 分钟。

12.分光光度计检测吸光度。波长设定=595nm。用 96 孔板测定时，应确保没有气泡，否则气泡会绝对增加吸光度的读数。

13.将待测样品的测定值逐一跟用 BSA 梯度稀释液测定值绘制的标准曲线比较得到待测样品的蛋白质浓度。

选择我们的改良Bradford法蛋白定量试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！