牛 TdT 牛末端脱氧核糖核苷转移酶，14 U/uL的用途包括通过 Okayama-Berg 法给载体或 cDNA 加上互补同聚尾，以及使用 dNTP、ddNTP 来标记 DNA 的 3’末端。

产品简介：

牛 TdT 牛末端脱氧核糖核苷转移酶，14 U/uL催化 dNTP 聚合于单链或双链 DNA 的 3’-OH 末端的反应，该反应不需要模板，但引物必须是至少有 3 个以上碱基的寡核苷酸。本产品的用途包括通过 Okayama-Berg 法给载体或 cDNA 加上互补同聚尾，以及使用 dNTP、

ddNTP 来标记 DNA 的 3’末端。

产品参数：

产品规格

5×末端脱氧核苷酸转移酶缓冲液的配方是：500 mM HEPES，pH 7.2，40

mM 氯化镁，0.5 mM DTT。（该缓冲液含有在 DNA 3’末端添加dNTP 实验的主要成分）

活性定义：以DNase 处理后的热变性小牛胸腺 DNA 为起始物，37℃，pH 7.2

的条件下，1 小时内使 1 nmol 的[3H]dTTP 掺入酸不溶性沉淀物所需的酶量定义为 1 个活性单位(unit)。

活性定义反应液：100 mM 二甲胂酸钠pH 7.2，8 mM 氯化镁，0.1 Mm

DTT，0.024%牛血清白蛋白，160 μg/mL 激活的小牛胸腺 DNA，0.5 mM [3H]dTTP。

酶贮存溶液：60 mM 磷酸钾 pH 7.2，150 mM 氯hua钾，1 mM DTT，50%甘油。

保存和运输

低温运输，-20℃保存，有效期 12 个月。

自备试剂

DNA，NaCl，EDTA，灭菌水，苯-酚/氯仿/异戊醇，无水乙醇

使用方法：

1. 按下表设置反应体系。

成分用量

自备的 DNA4-5 pmol(3’-termini)

5×末端脱氧核苷酸转移酶缓冲液10 uL

0.1%牛血清白蛋白5 uL

自备的 dGTP（脱氧鸟苷三磷酸）0.05-0.5 mM（终浓度）

TdT（末端脱氧核苷酸转移酶）10-15 U

                自备的灭菌水到 50 uL

2.37℃反应 30 分钟。

3.加入 5 uL 自备的 5 M NaCl 和 1 uL 的 0.5 M EDTA（pH 8.0）。

4.加入 50 uL 自备的（等量）的苯-酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），充分

5.混匀，再用冷的自备无水乙醇沉淀 DNA。

注：影响反应的因素有：添加的碱基种类(dATP，dTTP，dCTP，dGTP)，缓冲液中的二价阳离子(Mg2+，Mn2+，Co2+)，DNA 末端结构(3’-OH 突出末端，平末端，3’-OH 凹陷末端)。因此，每个反应都需要摸索最适条件。

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