CHAPS 细胞裂解及免疫共沉淀缓冲液其最大特点是提取的总蛋白可以保持蛋白和蛋白复合体的构型，非常适合后续的免疫共沉淀实验和酶活性检测。

产品简介：

本产品为 CHAPS 细胞裂解和免疫沉淀缓冲液，用于裂解动物培养细胞制备总蛋白抽提物。

产品特点：

1.其最大特点是提取的总蛋白可以保持蛋白和蛋白复合体的构型，非常适合后续的免疫共沉淀实验和酶活性检测。

2.不含氨基成分，可使用 NHS-ester 类的交联试剂。

3.跟 Bradford 法、Lowry 法和 BCA 法蛋白浓度测定试剂兼容。

4.裂解跨膜和细胞膜蛋白质提取后保持分子间的相互作用。本试剂在反应过程中能保持蛋白质构象以及蛋白质复合物的组装。

5.250mL 规格足够处理 800 个 10cm 培养皿培养的细胞样本。

6.起始材料可使用培养细胞，也可以使用实体组织。

7. 本产品只能用于科研。

产品参数：

产品规格

保存和运输

低温运输，4℃保存，有效期为 12 个月。

自备试剂

蛋白酶抑制剂或/和蛋白磷酸酶抑制剂、PBS、自选免疫沉淀抗体、免疫沉淀珠（G 蛋白或 A 蛋白珠）、离心机、细胞刮子、冷藏室或冷藏箱等。

使用方法：

一、实验准备

1.根据靶蛋白的特点，将自备的蛋白酶抑制剂或/和蛋白磷酸酶抑制剂加入到本产品（CHAPS细胞裂解及免疫共沉淀缓冲液）中，使其终浓度达到这些抑制剂的工作浓度，混匀后放冰上待用。同时将其他所需物品（如细胞刮子，离心管、Dounce 玻璃匀浆器等）进行预冷。下述所有溶液均为预冷溶液，所有离心均为 4℃离心。

二：培养细胞样本的裂解

2.用 1-3 个 10cm 培养皿培养细胞，待其汇合度达到 80-90%时为止。

3.按标准流程用PBS 洗涤细胞三次，每次用 5mL PBS。此步可去除残留的培养基血清蛋白以避免在后续 Western 印迹杂交时出现血清蛋白条带。

4.在每个培养皿中加入 300μL 补加了蛋白酶抑制剂或/和蛋白磷酸酶抑制剂的本产品，轻柔倾斜和旋转让缓冲液覆盖细胞表面，然后用细胞刮子将细胞刮下并转移到 1.5mL 离心管中。

5.冰上放置 10 分钟。每隔 2-3 分钟用手指弹击离心管数次以让细胞膜充分溶解， 然后直接进入第 8 步操作。注意不要涡旋震荡，避免蛋白变性或蛋白复合体解离。

三、实体组织样本的裂解

6.对冷冻的实体组织：将 100mg 在-80℃或液氮冷冻的实体组织放在装有液氮的研钵中研磨成粉末，再转移到预冷的 Dounce 玻璃匀浆器中，加入 300μL 预冷的补加了蛋白酶抑制剂或/和蛋白磷酸酶抑制剂的本产品，温和手动匀浆 6 次后冰浴 30 分钟，每间隔 5 分钟摇晃一次，然后直接进入第 8 步操作。

7.对新鲜的实体组织：用自备的预冷PBS 洗涤100mg 经过胰-酶处理的新鲜组织， 3000g 4℃离心 5 分钟，弃上清。在组织沉淀中加入 300μL 预冷的补加了蛋白酶抑制剂或/和蛋白磷酸酶抑制剂的本产品，轻柔吹打 3 次，在冰上用Dounce 玻璃匀浆器轻柔匀浆后冰浴 30 分钟，每间隔 5 分钟摇晃一次，然后直接进入第 8 步操作。

四、免疫共沉淀

8.用最高离心速度离心上步所得细胞裂解液 15 分钟，将上清液转换到预冷的

1.5mL 离心管中。

9.分 30μL 上清液做对照 A，剩余的样本用于免疫沉淀。预留的对照 A 可以放冰上待用，如果当天没用完，可以放﹣20℃或﹣80℃长期保存。后续的对照 B 和对照 C 处理相同。

10.在上清液中加入所选免疫沉淀抗体（优良抗体用量需自行摸索），轻柔颠倒混匀 30 秒后放摇床上在冷藏室或冷藏箱内摇晃至少 15 分钟，使抗体和上清液中的靶蛋白充分结合。如果有多管相同的重复样本，后续实验一样，可以汇集在一起后加入抗体。如果后续实验不同，则最好不要汇集。

11.按 300μL-2mL 混合液加 60μL 免疫沉淀珠的比例加入免疫沉淀珠，轻柔颠倒摇晃30 秒后放摇床上在冷藏室或冷藏箱内摇晃至少30 分钟以让免疫沉淀珠和靶蛋白-抗体形成复合物。

12.3000rpm 离心 5 分钟，将上清液转移到新的 1.5mL 离心管中作为对照 B 预留，沉淀为蛋白-抗体-沉淀珠复合物。注意：吸取上清时不要触及蛋白-抗体- 沉淀珠复合物沉淀。

13.向复合物沉淀中加入 300μL 含蛋白酶抑制剂的本产品，180 度轻柔旋转离心管 3 次，3000rpm 离心 5 分钟，保留上清液作为对照 C。

14.重复上步洗涤步骤至少 2 次，这两次的上清液不需要保留。

15.最后一次洗涤后，14000 rpm 离心 15 分钟使复合物沉淀充分沉淀，再吸弃残留上清液。

16.复合物沉淀可立即用自选的方法进行靶蛋白洗脱。如果后续实验为PAGE 电泳， 可以用 1×PAGE 上样液洗脱。在每 60uL 免疫沉淀珠得到的沉淀中加入100uL 上样液，涡旋震荡 30 秒，60℃保温 10 分钟，3000rpm 离心 5 分钟，上清即含有洗脱的靶蛋白和其抗体。

17.洗脱的靶蛋白可用于 PAGE 电泳、Western 杂交和活性检测等后续实验，也可以放﹣20℃或﹣80℃长期保存。注意：用洗脱的靶蛋白进行后续实验时需要用三个对照样本一起实验。Western 杂交时，最好选择跟本次实验所用抗体不一

样的抗体。

选择我们的CHAPS 细胞裂解及免疫共沉淀缓冲液，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！