无缝克隆试剂盒，不依赖内切酶和连接酶，不受限制性内切酶酶切位点的限制。本产品足够 20 次 20μL 体系的无缝克隆。

产品简介：

无缝克隆是一种简单、快速、高效的 DNA 定向克隆技术，该技术突破传统， 不依赖内切酶和连接酶，不受限制性内切酶酶切位点的限制，利用同源重组的原理，可将任何 DNA 片段克隆至任何载体的任何位点。反应及转化时间短，阳性率达 95%以上。此反应的示意图如下：

产品特点：

1.简单、高效地定向克隆 DNA 片段。

2.可同时定向克隆两个或多个 DNA 片段。

3.不依赖内切酶和连接酶，不受限制性内切酶酶切位点的限制。

4.省时，反应时间加转化时间短至 20 分钟。

5.PCR 产物（仅有目的条带、无非特异条带和引物二聚体）可直接进行重组反应，无需纯化。

6.本产品足够 20 次 20μL 体系的无缝克隆。

7.无缝克隆试剂盒只能用于科研。

产品参数：

产品规格

保存和运输

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂

线性化载体、DNA 片段、感受态细胞、SOC 或 LB 培养基和培养皿（含抗菌素和不含的）

使用方法：

一、线性化载体的制备：

可通过单酶切、双酶切或 PCR 扩增的方法来制备。（如果线性化不彻-底，将会导致阴性克隆的产生，推荐使用双酶切或 PCR 扩增的方法。）

二、DNA 片段的制备：

1. DNA 片段可通过 PCR 扩增或酶切的方法制备，PCR 扩增片段无需纯化即可用于重组反应。

2.PCR 扩增法引物设计原则：引物的 3’端必须包含 18-50 个能与模板 DNA 结合的碱基序列，以便 PCR 扩增出目的 DNA 片段。引物的 5’端必须包含15-80 个与线性化载体末端同源的碱基序列，以便 PCR 扩增片段能与线性化载体进行重组反应。

三、重组反应：

3.按照如下体系操作：

4.50℃反应 20 分钟，然后将离心管放置于冰上 2 分钟。如当天不进行转化实验，请将连接产物放-20℃保存。

四、转化：

5.取 4 μL 连接液至 50-100 μL 刚刚融化的感受态细胞中，轻轻混匀，冰浴 30分钟。

6.42℃水浴热激 90 秒。

7.立即放置于冰上静置 5 分钟。

8.加入 500 μL 无菌 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），37℃，200-250 rpm振荡培养 45-60 分钟。

9.吸取 200 μL 菌液涂板，为得到更多克隆，可先 4000 rpm 离心 3 分钟，弃掉部分上清，用移液器轻吹菌体，至充分悬浮，取全部菌液涂板，然后 37℃ 培养过夜（12-16 小时）。

10.用菌落 PCR、直接测序或其他方法鉴定重组子。

选择我们的无缝克隆试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！