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品牌 | 烜雅生物 | 货号 | XY-D-1628 |
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规格 | 50次 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 科研 | 应用领域 | 化工,生物产业 |
英文名称 | Forensic Nail DNA Extraction Kit | 保存条件 | -20℃ |
有效期 | 12个月 |
产品简介:
Linker-Adapter PCR 是用限制性内切酶酶切基因组DNA,产生 100-1500 bp的片段,然后在其两端加上 Linker,最后用识别 Linker 的引物进行 PCR 扩增的一种全基因组 DNA 扩增技术。其原理示意图如下:
产品特点:
1.即开即用,十分简单方便,用户不需要辛苦摸索条件。
2.所有反应一管式完成,不会有 DNA 的丢失。
3.适用于扩增没有降解的痕量样品、激光微切样品(Laser microdissection)、单细胞 DNA、单染色体或染色体片段。但不适合已经降解的 DNA。降解的 DNA 可选用本公司的 RCA 法全基因组扩增产品。
4.含荧光染料,可以实时监控扩增反应过程,不需要实验结束后再跑电泳,节约宝贵样品(因为需要进行全基因组扩增的样品都非常珍贵)。
5.可以将模板 DNA 扩增上万倍。
6.适用于探针标记,杂交,位点检测。但由于 Taq DNA 聚合酶的突变率较高,不推荐后续用于高通量测序。如果需要测序则建议使用 RCA 法扩增。
7.本产品足够 50 次 50 μL 体系的 LA-PCR 反应。
8.全基因组扩增试剂盒只能用于科研。
产品参数:
产品规格
成分 | 规格 | 包装 |
10×酶反应液 | 50 μL | 0.5 mL 绿盖管 |
蛋白酶溶液 | 25 μL | 0.5 mL 黄盖管 |
MseI 内切酶 | 25 μL | 0.5 mL 橙盖管 |
引物 1 | 干粉 | 0.5 mL 白盖管 |
引物 2 | 干粉 | 0.5 mL 白盖管 |
ATP 溶液,10 mM | 50 μL | 0.5 mL 紫盖管 |
T4 DNA 连接酶 | 50 μL | 0.5 mL 红盖管 |
2×染料法 qPCR MasterMix | 1.3 mL | 1.5 mL 本色管 |
超纯水 | 1.5 mL | 1.5 mL 蓝盖管 |
使用手册 | 1 份 | 无 |
保存和运输
低温运输,-20℃保存, 有效期为一年。
自备试剂
纯化好的 DNA 模板、超纯水。
使用方法:
1.如果是纯化好的 DNA,则直接用在管中加入 4 μL DNA,0.5 μL 10×酶反应液,然后直接进入下表的加 0.5 μL MseI 内切酶进行酶切的步骤,后续步骤同。
2.如果是含蛋白质的微量样品、单个细胞,单个染色体或染色体片段,则按下表进
进行操作:
成分管 1
(样本)管 2
(无模板对照)
待处理样品不超过 3.5 μL-
10×酶反应液0.5 μL0.5 μL
蛋白酶溶液0.5 μL0.5 μL
加自备超纯水到 4.5 μL到 4.5 μL
42℃保温 15 小时后 80℃10 分种
各加入 0.5 μL MseI 内切酶,总体积为 5 μL
37℃保温 3 小时后 65℃ 5 分种
再加入下列成分
引物 11.0 μL1.0 μL
引物 21.0 μL1.0 μL
超纯水0.5 μL0.5 μL
10×酶反应液0.5 μL0.5 μL
此时总体积为 8 μL。放 PCR 仪上,从 65℃降温到 15℃,每
分钟降低 1℃。然后再加入下列成分
ATP 溶液,10 mM1 μL1 μL
T4 DNA 连接酶1 μL1 μL
此时总体积为 10 μL。15℃保温过夜。再加入下列成分
超纯水14 μL14 μL
引物 21 μL1 μL
2×染料法 qPCR
MasterMix25 μL25 μL
按下列参数进行 5 步式 PCR: 第一步:68℃3 分钟。
第二步:(94℃ 40 秒,57℃ 30 秒,68℃ 1 分 30 秒,每增加 1 个循环加 1 秒)共 14 个循环。在 68℃采集 SYBR 通道的荧光信号。
第三步:(94℃ 40 秒,57℃ 30 秒,每增加 1 个循环加 1
秒,68℃ 1 分 45 秒,每增加 1 个循环加 1 秒)共 8 个循环。在 68℃采集 SYBR 通道的荧光信号。
第四步:(94℃ 40 秒,65℃ 30 秒,68℃ 1 分 53 秒,每增加 1 个循环加 1 秒)共 22 个循环。在 68℃采集 SYBR 通道的荧光信号。
第五步:68℃3 分钟。
3.有扩增的将有平缓的 S 曲线,无模板对照见没有此曲线。
4.所得扩增产物可以纯化后用于各种后续实验,包括再扩增。
选择我们的全基因组扩增试剂盒,就是选择精准、高效、可靠的检测方案,为您的科研实验保驾护航!