易错滚环扩增试剂盒（phi29 法）不含突变短的 DNA 所需要的环化试剂。本产品足够 50 次 20uL 体系的易错 RCA 反应。

产品简介：

易错 RCA（Error-Prone Rolling Circle Amplification）是利用 phi29 DNA多聚酶在一定条件下（如不同的 dNTP 浓度、不同的 Mg 浓度和 MnCl2 存在时）能够按较高的机率引入随机引入突变。易错 RCA 弥补了易错 PCR 的巨大缺陷，其中一个缺陷是易错PCR 没法使用短的 DNA 片段，因为PCR 引物就占了 40 个 bp 左右， 故不适合小片段 DNA 突变。但任何短链 DNA 经过环化后，均可进行易错 RCA，故易错 RCA 可以对短的DNA 片段进行突变。单链 DNA 模板易错 RCA 示意图如下：

产品特点：

1.即开即用，十分简单方便，用户不需要辛苦摸索条件。

2.配方经过精心优化，突变率稳定，一般能产生 3-5 个突变/kb。如果需要更高的突变率，只需把上一次易错 RCA 的产物用作下一次易错 RCA 的模板即可。也可以选购本公司的 Bst 法易错 RCA 试剂盒。

3.靶分子 DNA 既可以是长度只有几十 bp 的小片段 DNA，如启动子，适配子，酶活性区，核糖体结合区等，也可以是质粒，BAC，YAC 或全基因组。只是短的DNA 需要预先环化。

4.本试剂盒不含突变短的 DNA 所需要的环化试剂。

5.试剂含有荧光染料，可以实时检测反应情况，随时终止。也避免电泳，节约珍贵的扩增产物。

6.RCA 属于恒温扩增，只需要水浴或金属浴，不需要贵重的 PCR 仪器。

7.本产品足够 50 次 20uL 体系的易错 RCA 反应。

8.易错滚环扩增试剂盒（phi29 法）只能用于科研。

产品参数：

产品规格

保存和运输

低温运输，-20℃保存,有效期为一年。

自备试剂

环状 DNA 模板、超纯水。

使用方法：

1.首-次使用本试剂盒时，需要在装易错 RCA 引物干粉的黄盖管中加入 55uL 的自备超纯水，吹打混匀后短暂离心，放冰上待用。没有用完的引物需要放-20℃保存。

2.设置 20uL 体系的易错 RCA 反应。以下以一个样为例，每个样本最好设置两个浓度，每次实验设置一个无模板阴性对照：

成分浓 度 1 浓 度 2 阴 性 对 照

4×易错PCR 预混液5 uL5 uL5 uL

易错 RCA 引物1 uL1 uL1 uL 易错 RCA 专用 MnCl21 uL1 uL1 uL 环状 DNA 模板1ng50ng不加

补自备超纯水到19 uL19 uL19 uL

3.95℃2 分钟后，放室温自然冷却。

4.每管中加入 0.5uL 易错 RCA 专用 DNA 聚合酶。

5.30℃保温 24 小时，每 10 分钟设置为一个循环，在 SYBR 通道采集荧光信号。

6.实时检查易错 RCA 荧光信号，在两种情况下可以立即终止实验，不一定要等 24 小时结束。一是两个浓度模板中任何一个的荧光信号进入 S 型平台期，二是无模板阴性对照的荧光信号正好要爬升而样品的荧光信号已经爬升，此时可终止实验，将样本的扩增产物进行后续处理。

7.扩增结束后，对有扩增信号的样品，按常规操作进行 DNA 回收，再限制性内切

酶酶切验证。如果得到预期大小的片段，则胶回收 DNA，再进行克隆和测序等后续操作。

8.易错 RCA 的扩增产品可以用水稀释 10 倍后，再进行全基因组扩增，得到更多的DNA，然后再进行酶切，胶回收，克隆等后续操作。

选择我们的易错滚环扩增试剂盒（phi29 法），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！