粪便RNA纯化试剂盒（过柱法）操作比非柱式法更加简单快速，处理一个样品只需要约十几分钟。

产品简介：

由于粪便中有机质含量丰富，对 RT-PCR 等后续反应有极大的抑制作用， 所以从粪便中提取高纯度的 RNA 一直是十分棘手的问题。本产品是在天恩泽 基因粪便 RNAout 基础上开发的柱式粪便 RNA 提取产品。

产品特点：

1.操作比非柱式法更加简单快速，处理一个样品只需要约十几分钟。

2.去污染效果好，RNA 纯度更高，平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右。

3.得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、cDNA 合成等实验。

4.性价比高于进口的柱式粪便 RNA 提取产品。

5.试剂无毒无害,环保。

产品参数：

成份规格包装材料

粪便 RNA 纯化溶液 A50 mL60mL 本色瓶

粪便 RNA 纯化溶液 B15 mL15mL 棕色瓶

粪便 RNA 纯化溶液 C50 mL60mL 本色瓶

离心吸附柱50 套塑料袋

通用洗柱液50 mL60mL 本色瓶

RNA 洗脱液10 mL10mL 本色瓶

使用手册1 份无

运输及保存

粪便RNA纯化试剂盒（过柱法）常温运输和保存，溶液 B 长期保存需要放 4℃，有效期一年。

自备试剂

氯仿。

使用方法：

1.称取 0.5-1 g 粪便放入到含液氮的研钵中，迅速将冻成固体的粪便研磨成粉末后。

2.将粉末转移到 5-15mL 的塑料离心管中（不能使用玻璃离心管），加入 1 mL 65℃预热的粪便 RNA 纯化溶液 A，立即剧烈振荡 20 秒，充分混匀。

3.将匀浆物转移至干净的 1.5mL 塑料离心管中。

4.在离心管中加入 0.3 mL 的粪便 RNA 纯化溶液 B（溶液 B 用前需要摇匀，呈浑浊状）和 0.2 mL 自备氯仿，在振荡器上振荡 30 秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。

5.室温 13000 g 离心 3 分钟，两相间将有约 5-10 毫米厚的细胞破碎物。

6.将上清液(约 0.6 mL)转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中，下层有机相和中间层含有 DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100 uL 上清液不取。

7.加入等体积的粪便 RNA 纯化溶液 C，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生， 千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。

8.将一半的溶液（如果有沉淀，则先混匀）转移到离心吸附柱中，13000g 室温离心半分钟，弃穿透液。

9.将剩下的一半溶液（如果有沉淀，则先混匀）转移到同一离心吸附柱中， 13000g 室温离心半分钟，弃穿透液。

10.加 0.7 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加 0.3 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。

11.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。

12.将离心吸附柱转移到 RNase-free 收集管中，加入 50-100 uL RNA 洗脱液，室温放置 1-2 分钟。

13.13000g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

14.RNA 完整性的电泳检测：由于粪便 RNA 含有肠道上皮细胞和肠道细菌的RNA，它们的分子量大小不一，所以电泳时不会形成清晰的条带。

15.RNA产量产率测定：通过OD260 的光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度×体积)和产率(RNA产量/粪便的用量)。

16.RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之

间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分 别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。

选择我们的粪便RNA纯化试剂盒（过柱法），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！