动物线粒体DNA纯化试剂盒（过柱法，PCR级）不需要单独纯化线粒体，操作简单快捷。

产品简介：

动物线粒体 DNA（mtDNA）是进行分子进化研究和母性遗传研究的重要材料，但传统的两步式动物 mtDNA 提取方法需要先温和裂解动物细胞，分离线粒体，然后再从线粒体中提取mtDNA。此方法中的温和裂解细胞的条件十分难以控制，需要针对不同组织材料单独进行优化，因此纯化效果差异很大。

产品特点：

1.不需要单独纯化线粒体，操作简单快捷。

2.得到的动物 mtDNA 只能用于 PCR 分析，不能用于其它实验。

3.可以用于培养的动物细胞，实体动物组织和血液。每 1E7 个动物细胞一般能得到 100 ng 左右的mtDNA，每克实体动物组织一般能得到 1-2 g mtDNA。

4.本产品不能用于纯化植物线粒体 DNA（需要另购）。

5.本试剂盒足够 50 次微量提取。

6.动物线粒体DNA纯化试剂盒（过柱法，PCR级）只可用于科研。

产品参数：

成分规格包装

动物线粒体 DNA 纯化溶液 A13 mL15 mL 本色瓶

动物线粒体 DNA 纯化溶液 B13 mL15 mL 棕色瓶

动物线粒体 DNA 纯化溶液 C18 mL30 mL 本色瓶

离心吸附柱50 套塑料袋

通用洗柱液50 mL60 mL 本色瓶

DNA 洗脱液（基因组纯化用）

10 mL10 mL 本色瓶

使用手册1 份无

运输及保存

待处理样品，0.25%胰-酶消化液，PBS 缓冲液，1.5 mL 塑料离心管

自备试剂

常温运输与保存，有效期为 12 个月。

使用方法：

一、培养细胞的预先处理（本试剂盒不含相关试剂）

1.用自备的 0.25%胰-酶消化液处理约 1E7 个培养的动物细胞，离心收集后弃上清，保留细胞沉淀。

2.用PBS 缓冲液洗涤细胞沉淀两次，最后得到的细胞沉淀将直接用作动物 mtDNA

提取的材料。

二、动物组织细胞预处理（本试剂盒不含相关试剂）

3.用剪刀将 1 g 新鲜的动物组织-剪碎（芝麻大小最好），转移到 1.5 mL 塑料离心管中，直接用作动物 mtDNA 提取的材料。注意：不能使用冻存的动物组织，因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体膜和细胞膜刺破，其DNA 已经释放出来， 被体液中的 DNA 酶降解。

三、血液预处理

4.将 3-5 mL 抗凝外周血静置 30 分钟或低速离心 5 分钟，取白细胞层。

5.用自备 PBS 缓冲液洗涤白细胞两次，得到的白细胞沉淀用于mtDNA 提取。四、线粒体粗提物制备

6.用自选方法将 1E7 个培养细胞或 1 g 实体组织匀浆。

7.室温 700×g 离心 6 分钟，收集上清。

8.将上清在室温 10000×g 离心 10 分钟，得线粒体粗提物沉淀。五、mtDNA 提取

9.在细胞沉淀或剪碎的组织或线粒体粗提物沉淀中加入 250 L 冰浴的动物线粒体

DNA 纯化溶液 A，充分吹打分散。如果是剪碎的组织，不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

10.加入 250 L 常温的动物线粒体 DNA 纯化溶液 B（如果溶液B 有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用），轻柔颠倒混匀 10 次，不要剧烈振荡。

11.冰上放置 6-8 分钟。注意不要超过 8 分钟。

12.加入 350 L 冰浴的动物线粒体 DNA 纯化溶液 C，轻柔颠倒混匀 6 次，可见白色沉淀物产生。冰上放置 20 分钟。

13.室温 13000×g 离心 10 分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的 溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。

14.静置 5 分钟以让DNA 与离心吸附柱充分结合，此步十分重要。

15.室温 13000×g 离心 1 分钟，弃收集管中的废液。

16.加入 500 L 的通用洗柱液，室温 13000×g 离心 1 分钟，弃收集管中废液。

17.重复上步 1 次。

18.室温 13000×g 离心 1 分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留通用洗柱液会影响DNA 的后续使用（如DNA 上样时不能沉淀到加样孔中）。

19.将离心吸附柱置于一个新的 1.5 mL 塑料离心管中，加入 50 L DNA 洗脱液（基因组纯化用），室温放置 2 分钟。

20. 室温 13000×g 离心 1 分钟，离心管底溶液即mtDNA。每 1E7 个动物细胞一般能得到 100 ng 左右的 mtDNA，每克实体动物组织一般能得到 1-2 g 的 mtDNA。所得 DNA 量较少，不推荐使用 OD 检测或电泳检测的方式对所得DNA进行检测。检测如果 DNA 需要浓缩，可以使用本公司的核酸浓缩剂。本试剂盒

得到的 mtDNA 一般有断裂，电泳时不呈现专一的带，但不影响作为 PCR 模板。

选择我们的动物线粒体DNA纯化试剂盒（过柱法，PCR级），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！