单细胞全基因组扩增试剂盒(MDA荧光染料法)可使用各种来源的样品，包括培养细胞和胚胎细胞等。

产品简介：

本产品是基于DNA环化技术和MDA技术、用于从单细胞（或数个细胞）中制备和扩增全基因组的试剂盒。

产品特点：

1.即开即用，不需要单独准备和优化所需试剂。

2.可以扩增单个细胞的基因组达上万倍。

3.具有全基因组扩增的所有特点，包括高产量和高保真性。

4.可使用各种来源的样品，包括培养细胞和胚胎细胞等。

5.产物可用于多种后续试验，包括多重PCR、长片端PCR、定量PCR、克隆、文库构建、单倍型分析、测序、基因芯片分析、各种遗传分析（片段差异，微卫星差异、SNP、STR）等。

6.单细胞全基因组扩增试剂盒(MDA荧光染料法)足够30 次微量扩增。

产品参数：

成份规格包装

单细胞裂解液(扩增专用)100 μL0.5 mL 本色盖

单细胞 MDA 扩增溶液 A30 μL0.5 mL 蓝色盖

MDA 专用随机引物溶液60 μL0.5 mL 白色盖

20×饱和染料30 μL0.5 mL 棕色管

10×DNA 环化-扩增缓冲液50 μL0.5 mL 绿色盖

dNTP（25mM）30 μL0.5 mL 黄色盖

DNA 环化酶A15 μL0.5 mL 紫色盖

DNA 环化酶B15 μL0.5 mL 橙色盖

Phi 29 DNA 聚合酶（10U/μL）15 μL0.5 mL 红色盖

使用手册1 份无

运输及保存

低温运输、-20℃保存，有效期一年。

自备试剂

超纯水,重悬细胞缓冲液

使用方法：

1如果有 N 个样本，则标记 N+1 个 0.2 mL 的PCR 管，在每个管中加入 2.5 μL 单细胞裂解液（扩增专用）。多出的一个管标为无模板对照管。

2将细胞悬浮在自备的 PBS 缓冲液或其他合适的缓冲液中，在显微镜下用毛细管转移单个细胞（或数个细胞，总体积不超过 2.5 μL）到上步准备的管中。在无模板对照管中不加入细胞，只加入 2.5 μL 重悬细胞所用的缓冲液。

3室温放置 10 分钟裂解细胞，所得裂解液为单细胞裂解液。

1.   在上步的 5 μL 单细胞裂解液中按下表加入各成分：

成分N 个样本管无模板对照管

超纯水4.5 μL4.5 μL

DNA 环化酶A0.5 μL0.5 μL

在 PCR 仪器上 37℃ 2 小时，65℃ 20 分钟，95℃ 5 分钟，

待温度下降到 30°C 左右加入

10×DNA 环化-扩增缓冲液0.5 μL0.5 μL

单细胞 MDA 溶液 A1 μL1 μL

DNA 环化酶B0.5 μL0.5 μL

超纯水3 μL3 μL

在 PCR 仪器上 65℃ 1 小时，85℃ 10 分钟后加入

10×DNA 环化-扩增缓冲液0.5 μL0.5 μL

MDA 专用随机引物溶液2 μL2 μL

20×饱和染料1 μL1 μL

dNTP（25mM）1 μL1 μL

在 PCR 仪器上 95℃ 5 分钟，自然冷却到室温后加入

phi29 DNA 聚合酶，10U/μL0.5 μL0.5 μL

合计20 μL20 μL

430℃保温 12 小时。最好使用 PCR 仪进行 30℃保温（注意：不是 37℃）并打开热盖保温。每 10 分钟设置成一个循环，采集一次 SYBR 通道的荧光信号。由于是可以实时检测反应，所以反应不一定要在设置时间到达后结束，可以在扩增曲线进入平台期后（已经没有新的 DNA 合成）结束。

565℃保温 10 分钟使phi29 DNA 聚合酶灭活。注：由于 phi29 DNA 聚合酶有DNA

外切活性，所以最好将其灭活以免干扰后续反应。

6典型实验结果。有扩增的样本将有平缓的 S 荧光曲线，无模板对照将没有此标准扩增曲线（见下图）或扩增曲线：

若采用 30℃金属浴或水浴，必须在样品管中加入 50μL 石蜡油以防水分蒸发，使用电泳检测或PCR 检测是否有扩增。

7扩增所得 DNA 可以用于后续实验。

选择我们的单细胞全基因组扩增试剂盒(MDA荧光染料法)，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！