超快质粒DNA纯化试剂盒质粒DNA产量跟经典碱变性法相当，一般1-5mL可以得到3-15ug（对低拷贝质粒）和5-35ug（对高拷贝质粒）。

产品简介：

现在最-常用的质粒纯化试剂盒几乎都是基于碱变性原理，必须使用三种溶液进行处理，一般需要30分钟左右。本产品采用新型技术，只需要一种溶液处理即可以完成细菌裂解，并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。

产品特点：

1.一步式，提取一个样品只需10分钟左右，比传统的碱变性方法快捷。

2.质粒DNA产量跟经典碱变性法相当，一般1-5mL可以得到3-15ug（对低拷贝质粒）和5-35ug（对高拷贝质粒）。

3.适用于高拷贝、中拷贝和低拷贝质粒的提取。

4.适用于各种大肠杆菌宿主菌。

5.所得质粒DNA呈超螺旋结构的比例比碱变性法更高。

6.基因组DNA污染少。

7.由于操作太快，溶液中的RNase来不及降解RNA，一般会有少量RNA污染，但不影响后续实验。

8.可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆、测序等实验。

9.超快质粒DNA纯化试剂盒只能用于科研。

产品参数：

成份规格包装材料

超快质粒DNA纯化溶液A30 mL30ml棕色玻璃瓶

离心吸附柱50套塑料袋

专用洗柱液50 mL30mL本色瓶

DNA洗脱液（基因组纯化用）10 mL10mL本色瓶

使用手册1份无

运输及保存

常温运输及保存，超快质粒DNA纯化溶液A长期保存需要放4℃，有效期一年。

自备试剂

无

使用方法：

1.用塑料离心管收集0.5-5 mL过夜培养的饱和新鲜菌液，室温14000g离心半分钟，弃上清（培养基）。注意: 可以使用-20℃冻存的细菌沉淀和4℃放置过夜的细菌培养液，但后者的质粒回收效率较低。

2.在细菌沉淀中加入0.6mL超快质粒DNA纯化溶液A，充分吹打或振荡裂解细菌直到裂解变澄清，一般需要半分钟左右。注:此方法不同于碱裂解法，此步需要充分吹打，使基因组DNA断裂。

3.将裂解液全部转移到离心吸附柱中，直接离心。如果静置3-5分钟充分裂解细菌后再离心，则质粒回收率将提高10%左右。

4.室温14000 rpm离心1分钟，弃穿透液。一般菌液越多裂解液越稠，需要离心的时间就越长，所以不建议使用超过5mL的起始菌液。如果离心1分钟后还有少量液体在离心柱中残留，可以适当延长离心时间直到所有液体成功过柱。有的离心机标注的离心速度跟实际的速度不符合，这种情况下，可以使用离心机的最大离心速度离心。

5.在离心吸附柱中加入0.7 mL的专用洗柱液，室温14000rpm离心半分钟，弃穿透液。

6.如果需要，可以再在离心吸附柱中加入0.3 mL的专用洗柱液，室温14000rpm离心半分钟，弃穿透液。此步可以降低RNA污染，但由于RNA污染并不影响后续实验，为了快捷，一般可以跳过此步。

7.室温14000rpm离心半分钟，甩干残留液体。注意：此步不能省略，否则残留洗柱液会影响后续的电泳上样（DNA沉不到加样孔里去）和酶反应。

8.将离心柱置于一个自备的1.5 mL塑料离心管中，加入50 uL DNA洗脱液（基因组DNA专用）。

9.室温14000 g离心半分钟，离心管底溶液即质粒DNA，可以直接用于后续实验（浓度测定、酶切、电泳和测序）或放冰箱长期保存。 一般1-5mL菌液可以得到3-15ug（对低拷贝质粒）或5-35ug（对高拷贝质粒）质粒DNA。

10.本方法得到的质粒DNA一般足够各种后续实验。如果需要进一步提高质粒DNA产量，可以再加30-50uL DNA洗脱液2.0到离心吸附柱中再次洗脱，可以得到相当于第一次洗脱量10-20%的质粒DNA。也可以将第一次洗脱得到的质粒DNA溶液再加到离心吸附柱中洗脱，可以使质粒DNA产量提高10-20%。

注意：本方法提取的质粒DNA有如下特点：

1、因为没有使用剧烈的碱变性步骤，所以质粒呈现天然的超螺旋结构的比例较大。

2、由于整个操作非常快速，又没有使用碱来降解RNA，所以试剂中的RNase都来不及把细菌的内源RNA彻-底降解，故所得质粒比碱变性法提取的质粒有更多的RNA污染，因此不建议使用测OD的方法确定质粒DNA的浓度，故最好采用电泳比较法，即通过比较质粒DNA跟浓度已知的DNA marker的相对亮度来确定质粒的浓度。注意：RNA污染一般不影响电泳、酶切和测序。

3、如果需要彻-底去除RNA污染，则需要在每次加入专用洗柱液后，室温放置2-5分钟，让其含有的RNase充分降解结合在膜上的RNA，离心时降解成小片段的RNA就穿透到收集管，结合在膜上的DNA就更纯净。

选择我们的超快质粒DNA纯化试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！