单细胞逆转录试剂盒足够进行 200 次 5 L 体系的单细胞裂解和 200 次 10 L 体系的逆转录。

产品简介：

单细胞是非常重要的实验材料，但是由于单细胞中的 RNA 很少，一个人体细胞只有 6 pg 的基因组 DNA，一个小鼠胚胎干细胞只有 2 万多个mRNA 分子，一个小鼠成纤维细胞只有 50 万个 mRNA 分子。因此单个细胞根本没法用来进行核酸纯化。为了克服次缺点，本公司开发了单细胞逆转录试剂盒。

产品特点：

1.直接用 1-500 个细胞进行逆转录，免去 RNA 纯化过程中不可避免的

RNA 丢失。

2.得到的 cDNA 可以用于 RT 和 PCR 分离的两步法 RT-PCR，方便用户用珍贵的 cDNA 进行更多靶基因的后续染料法或探针法 qPCR 检测。

3.所含 RNA 保护剂可有效抑制 RNA 的降解。

4.所含保护剂能有效克服痕量 RNA 因非特异性吸附产品的丢失。

5.本产品足够进行 200 次 5 L 体系的单细胞裂解和 200 次 10 L 体系的逆转录。

6.本产品只能用于科研。

产品参数：

成份规格包装

单细胞裂解液（RNA 专用）1 mL1.5 mL 本色盖

5×单细胞 RT Buffer A400 L0.5 mL 白盖管

5×单细胞 RT Buffer B400 L0.5 mL 绿盖管

单细胞专用 MMLV100 L0.5 mL 红盖管

使用手册1 份无

运输及保存

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂

制备单细胞所需试剂

使用方法：

1.用户需要根据样本细胞种类选用合适的方法（如胰-酶消化）制备单细胞悬液，对已经处于单细胞悬浮状态的细胞（如卵细胞），则可以跳过此步。本试剂盒不含相关试剂。

2.将 5.5 L 单细胞裂解液（RNA 专用）预先分装到 0.2 mL PCR 管中或

96 孔板中，分装的管数根据样品数决定。

3.用流式细胞仪或在倒置显微镜下用液压显微操作器将 1-500 个细胞转移到上步所得的、预装了裂解液的PCR 管或 96 孔板中。

4.细胞进入裂解液后，裂解即发生。细胞裂解后在常温最多只能放 5 小时。如果不需要立即使用，必须将样品放-80℃长期保存。细胞裂解液可以 反复冻融最多 5 次。

5.如果立即使用，则在裂解样品中加入 2 L 5×单细胞 RT Buffer A。

6.65℃保温 5 分钟后立即放冰上。

7.加入 2 L 5×单细胞 RT Buffer B。

8.加入 0.5 L 单细胞专用 MMLV，轻柔吹打混匀，总体系为 10 L。

9.在 PCR 仪上按下列参数进行逆转录反应：25℃保温 5 分钟，50℃保温

60 分钟，55℃保温 15 分钟，70℃保温 15 分钟。

10.所得 cDNA 可以直接用于后续PCR，也可以放-20℃长期保存。后续染料法 qPCR：本产品不含相关试剂，操作过程仅供参考。

11.加入 50 L 自备超纯水到 10 L cDNA 中稀释 cDNA。

12.取 3 L 上步所得 cDNA 稀释液作为 PCR 模板，加入浓度为 4 M 的自备 PCR 引物各 1L，加入 5L 2×染料法PCR Mix，总体积为 10 L。

13.根据选定的 PCR 程序进行染料法 qPCR 并进行溶解曲线分析。

选择我们的单细胞逆转录试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！