2×染料法 qPCR MasterMix（含 RNase H） 2×，产品为 2×预配液，操作步骤已经最大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。

产品简介：

本产品是基于荧光染料检测的即用型 PCR 试剂盒，可以对靶片段进行实时定量PCR 分析。产品含有经过优化的缓冲液组分、Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、 SYBR Green I 及耐热 RNase H 等所有实时定量 PCR 所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行实时定量 PCR 反应，具有广泛的用途。

产品特点：

1.方便，用户只需准备模板和引物即可以进行实时定量 PCR 实验。

2.含有耐热 RNase H,可以抑制残存 mRNA 对 PCR 反应的作用。

3.产品为 2×预配液，操作步骤已经最大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。

4.扩增效率和灵敏度更高。

5.快捷，即用型的预配液使加样操作步骤简化，避免了交叉污染，降低实验误差。

6.各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。

7.本规格有 1mL，足够 100 次 20uL 体系的染料法荧光定量 PCR。

8.2×染料法 qPCR MasterMix（含 RNase H） 2×只供科研使用。

产品参数：

成份规格包装

2×染料法 qPCR MasterMix

（含 RNase H）1mL1.5mL 棕色管

使用手册1 份1 份

运输及保存

低温运输，-20℃保存,有效期一年。

自备试剂

DNA 模板、引物、超纯水。

使用方法：

1. 如果有 N 个样品（最好含一个样本制备阳性对照和一个样本制备阴性对照）并且做定量分析，最好设置 N+7 个反应，多出的 7 个中，6 个用于 6 点标准曲线，一个是扩增阴性对照（NC）。在 N+7 个 PCR 管中，加入下列成分。如果是做定性分析，则 6 个做标准曲线的样品缩减成一个扩增阳性对照（PC），用户自己需要

根据下表进行适当修改（把 6 个标曲反应改成 1 个阳性对照反应）。

成分N 个样品管6 个标准曲线管NC 管

2×染料法 qPCR MasterMix

（含 RNase H）各 10uL各 10uL10uL

自备引物 1（10uM）各 1uL各 1uL1uL

自备引物 2（10uM）各 1uL各 1uL1uL

自备基因组 DNA10-100ng不加不加

或自备 cDNA1-10ng不加不加

自备阳性对照模板（6 各梯度）不加各 1uL不加

阴性对照模板(一般用水)不加不加1uL

自备 50×自备 ROX I

或 ROX II 染料(见附)各 0.4uL各 0.4uL0.4uL

补超纯水到20uL20uL20uL

2.放入荧光 PCR 仪中进行扩增,下表的扩增参数仅供参考。

3.通过溶解曲线分析的结果排除无效数据。有 Ct 值，但 Tm 值跟扩增阳性对照 Tm 不一样的样品（包括对照和待测样品），归为假阳性，数据无效，不予以分析。Tm 跟扩增阳性对照 Tm 一致的，为有效 Ct。

4.如果两种阴性对照（样本制备阴性对照和扩增阴性对照）的溶解曲线所得 Tm 值跟扩增阳性对照的Tm 值一样，说明环境或试剂可能有过去的PCR 扩增产物污染， 则此次实验无效，需要解决污染问题再进行实验。

5.如果两种阴性对照（样品制备阴性对照和 PCR 阴性对照）是假阳性，可以继续分析其它样品有效数据。

6.对定量检测，以 6 个标准曲线样品的浓度的 log 值为横轴，以有效 Ct 值为纵轴， 绘制标准曲线。再以待测样品的有效 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的log 值，再换算出待测样品的 DNA 浓度。

7.对定性检测，则得到有效 Ct 值的样本为阳性，无有效 Ct 值的为阴性。附：

下列信息仅供参考，具体以 qPCR 仪器的使用手册为准。

1 ． 不需要 ROX 的机型： Agilent MX3000 和 MX4000 、iCycler IQ 、Light Cycler480、Smart Cycler System、Thermal Cycler Dice Real Time System等型号的荧光 PCR 仪器不需要加 ROX 染料，但加入的话也不会影响整个 PCR 分析。

2.需要使用 ROX I 的机型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step One、 Step One Plus。

3.需要使用 ROX II 的机型： ABI Prism7500、7500Fast、MJ Opticon、MJChromo4、Corbett Rotor Gene 3000。

选择我们的2×染料法 qPCR MasterMix（含 RNase H） 2×，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！