乳酸乳球菌电转感受态细胞制备试剂盒操作简单，即开即用，用户不需要花时间优化条件。

产品简介：

本产品是用于制备乳酸乳球菌电转感受态细胞的试剂盒。

产品特点：

1.操作简单，即开即用，用户不需要花时间优化条件。

2.制备得到的电转感受态细胞可以-80℃保存一年，方便多次使用，免去每次转化都要新鲜制备感受态细胞。

3.主要用于乳酸乳球菌，但能否用于其他乳球菌不详。

4.最高转化效率可达到 2×10E7 个转化子/g 质粒 DNA，但实际效率跟质粒长度、质粒浓度、恢复培养基等多种因素相关。

5.得到的电转感受态细胞可以用各种穿梭质粒 DNA 进行电转化。

6.本试剂盒足够制备 20 次，共 200 管乳酸乳球菌电转感受态细胞（每管 70  μL）。

7.乳酸乳球菌电转感受态细胞制备试剂盒只能用于科研。

产品参数：

成份规格包装

乳酸乳球菌电转感受态细胞制备溶液 A50 mL×360 mL 本色瓶

乳酸乳球菌电转感受态细胞制备溶液 B50 mL60 mL 本色瓶

乳酸乳球菌电转感受态细胞制备溶液 C30 mL30 mL 本色瓶

使用手册1 份无

运输及保存

常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂

GM17 液体培养基、含 0.5 M 蔗糖和 1%甘-氨酸的 GM17 液体培养基、恢复培养基（含2 mM CaCl2 和 20 mM MgCl2 的 GM17 液体培养基）、600 nm 分光光度计、电转仪。

使用方法：

一：电感受态细胞的制备

1.挑取平板划线后培养得到的新鲜单菌落，接种到5 mL 自备的GM17 液体培养基中。

30℃静置厌氧培养 12-16 小时。

2.转移 2.5 mL 上步所得培养菌液到 50 mL 自备的 GM17 液体培养基中。30℃静置厌氧培养 12-16 小时。

3.转移 4 mL 上步所得培养菌液到自备的 250 mL 含 0.5 M 蔗糖和 2.5%甘氨-酸的GM17 液体培养基中，30℃静置厌氧培养直到 OD600 达到 0.5-0.8 之间。

4.将培养物转移到无菌离心管中 6000 rpm 10 分钟，弃上清。离心时将洗涤液 B 和洗涤液 C 放冰上预冷待用。

5.加入 7 mL 的溶液 A 重悬细菌。此时细菌的浓度约为 1×10E9 个/mL。

6.重悬后室温放置 30 分钟，4℃ 6000 rpm 10 分钟，弃上清。室温放置 30 分钟很重要，不能跳过。

7.加入 1.5 mL 预冷的溶液B 重悬细菌，然后 4℃ 6000 rpm 10 分钟，弃上清。

8.再加入 1.5 mL 预冷的溶液 C 重悬细菌，然后 4℃ 6000 rpm 10 分钟，弃上清。

9.再加入 0.7 mL 预冷的溶液B 重悬细菌，按每管 70 L 分装到 1.5-2.0 mL 的离心管中，此时细菌的浓度约为 1×10E10/mL，共得 10 管电感受态细胞。

10.将感受态细胞全部放入-80℃冰箱待用。注意：不能放在液氮中，否则将丧失电转化能力。

二：电转化乳酸乳球菌感受态细胞（本试剂盒不含相关试剂）

11.将装有 70 μL 感受态细胞的冷冻管从冰箱取出的、放置在 30℃水浴中快速化冻（快速化冻的效果好于缓慢化冻）。

12.加入 500 ng 左右质粒 DNA 并轻柔混匀。

13.迅速转移到预冷的、距离为 0.2 cm 的电击杯中。

14.按电击仪的手册设置电击参数并进行电击处理，参考条件为：12.5 kV/cm (对 0.2 cm 的电击杯，则为 2.5 kV，200 Ω，25 μF，相当于脉冲长度为 4 ms)。各厂家电转仪器的使用略有不同，请严格按电击仪厂家提供的手册进行操作。注意：如果爆杯，可能原因一是样品含有气泡，可在加样时注意避免或稍静置一会儿再电转； 二是电转杯未清洗干净、有杂质或老化，可重新清洗或更换电转杯；三是样品含盐量较高，可在第 9 步重悬后，离心弃上清并再次用 B 溶液重悬再进行后续操作；四是电压过高，可将电压调整至 2.0 kV，再次尝试。

15.电击后迅速将细胞和 1 mL 预冷的恢复培养基（配方见自备物品）轻柔混匀，再转移到 1.5 mL 的塑料离心管中，30℃静置厌氧培养 2 小时。

16.取 0.2 mL 涂盘于含相应抗菌素（由质粒的抗性基因决定）的 GM17 平板上，30℃ 厌氧培养 1-2 天。

17.观察并记录转化子，计算转化效率，并进行后续实验。

选择我们的乳酸乳球菌电转感受态细胞制备试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！