一站式蛋白质非变性PAGE电泳试剂盒（高pH）即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。

产品简介：

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native PAGE)是目前电泳法分离活性蛋白的主要方法之一，跟 SDS-PAGE 根据分子量大小分离蛋白质不同，它主要根据蛋白质的 pI 分离蛋白质。由于蛋白质的 pI 各不相同，所以对不同靶蛋白质需要选用具有不同 pH 的电泳体系。单独配制不同 pH 的 Native PAGE 电泳胶十分繁琐，为此本公司开发了本产品。

产品特点：

1.即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。

2.非变性，电泳过程中蛋白质保持天然的构象和亚基之间的相互作用，得到的蛋白质一般都具有生物活性（而 SDS-PAGE 得到的蛋白没有活性）。

3.可以用于分析蛋白质和 DNA 或 RNA 的相互作用、蛋白修饰、蛋白构型改变、回收有活性蛋白质等试验。

4.电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交等实验。

5.本产品足够 30 次mini PAGE 电泳。

6.一站式蛋白质非变性PAGE电泳试剂盒（高pH）只能用于科研。

产品参数：

成份规格包装

丙烯酰胺干粉60 g250 mL 棕塑瓶

甲叉双丙烯酰胺干粉3 g5 mL 本色瓶

TEMEDCAS:110-18-91.5 mL1.5 mL 棕色管

过硫酸铵干粉CAS:7727-54-01 g1.5 mL 白盖管

4×高 pH 浓缩胶配胶液pH 6.7100 mL125 mL 本色瓶

4×高 pH 分离胶配胶液pH 8.9200 mL250 mL 本色瓶

高 pH 电泳液pH 8.3（干粉）10 L500 mL 本色瓶

5×高 pH 上样液1 mL1.5 mL 棕色管

使用手册1 份1 份

运输及保存

常温运输和保存，5×高 pH 上样液需低温运输、-20℃保存，保存期为一年。

自备试剂

去离子水、天然 PAGE 蛋白质标准或蛋白质等电电泳标准品。

使用方法：

一：配制分离胶

1.确定浓度。对分子量在 100 kD 以上的蛋白质，可选用 3-5%的胶；对分子量在20-150 kD 之间的蛋白质，可选用 5-10%的胶；对分子量在 10-80 kD 之间的蛋白质，可选用 10-15%的胶。对未知样品，建议使用 7.5%的胶。

2.配制 10%的APS（过硫酸铵）：按每 0.1 克过硫酸铵干粉加 1 mL 去离子水的比

例配制 10%的 APS 溶液，该溶液可以在 4℃存放一周。

3.配制 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺（19：1）溶液:在本产品提供的装有 60 克丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入 146 mL 自备的去离子水和 3 g 甲叉双丙烯酰胺,充分摇晃直到溶解（约需 10-20 分钟）即得 200 mL 30%丙烯酰胺（19：1）溶液。此溶液最好在一个月内用完，必须 4℃避光保存。

4.配 10 mL 分离胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量)：在一个 25 mL 的三角瓶中，先加入 4.2 mL 去离子水、3.3 mL 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺（19： 1）溶液和 2.5 mL 4×分离胶配胶液。

5.摇晃混匀后抽真空 10-15 分钟以去除溶液中的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除的话将影响丙烯酰胺聚合反应）。

6.加入 50 μL 新配制的 10%APS 和 10 μL TEMED（这是配制 10 mL 胶的用量，配制更大体积的胶则按比例增加），迅速摇匀后倒胶。

7.在胶面距离顶部 1-1.5 cm 的时候停止灌胶。然后覆盖一层 1-5 mm 厚的水，使胶顶部液面平整。由于比重不同，水和丙烯酰胺溶液不会混合。

8.室温聚合 30-60 分钟后，用 1×分离胶配胶液洗涤凝固的胶的顶部，待用。

二：配制浓缩胶（浓缩胶可以提高分辨率，适合于成分复杂的样品，一般使用浓度为4%。使用浓缩胶时蛋白质泳动速度主要跟其尺寸和形状相关。因浓缩胶 pH 跟分离胶pH 不同，蛋白质可能会发生聚合和沉淀。对成分单一的样品，可以不用浓缩胶，此时蛋白的泳动速度主要跟其电荷密度，尺寸和形状相关。

9.配 10 mL 浓缩胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量): 在一个 25 mL 的三角瓶中，先加入 6.2 mL 去离子水、1.3 mL 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺（19： 1）溶液和 2.5 mL 4×浓缩配胶液。

10.摇晃混匀后抽真空 10-15 分钟以去除溶液中的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应）。

11.按上表用量加入 50 μL 10%APS 和 15 μL TEMED（这是配制 10 mL 胶的用量，配制更大体积的胶则用量需按比例增加），迅速摇匀后在已经凝固的分离胶上倒胶。

12.在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子。

13.室温聚合 30-60 分钟，拔出梳子，用 1×电泳液冲洗加样孔。三：电泳

14.将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够 1×电泳液。注：本产品提供

10 升电泳液，用前需将所有干粉溶解在 1 L 水中得 10×电泳液（注：需要 65℃ 加热），可以室温放置，用时再稀释成 1×电泳液。一般不需要再调节 pH，但保险起见，可以用 pH 试纸测试一下 1×电泳液。高pH 电泳缓冲液的pH 是 8.3。

15.连接电极。如果浓缩胶和分离胶的 pH 高于靶蛋白pI，靶蛋白将带负电荷并向阳极

移动，可以按标准的 SDS-PAGE 方法接通电极（上阴极下阳极）；如果浓缩胶和分离胶 pH 低于靶蛋白pI，靶蛋白将带正电荷并向阴级移动，此时应该下阴极上阳极。

16.300 V 预电泳直到电流不再降低（约需要 30 分钟）以去除残留过硫酸铵。

17.换电泳液。

18.在液体蛋白质样品中加入 5×上样液（16 μL 液体样品加 4μL 上样液）后上样。

0.75 mm 厚的胶可以上 10 μL，1.5 mm 厚的胶可以上 20 μL。在未用加样孔中也要加 1×上样液以防有样品的空道的样品扩散。注意：如果用考染检测，每个孔的蛋白最好在 50-100 μg 总蛋白，如果银染则只需要 1 μg 即可。样品如果是蛋白质沉淀，可用 1×上样液直接溶解蛋白质沉淀后再上样。蛋白质溶液或沉淀中不能含有能够改变上样液 pH 的残留成分（如蛋白质沉淀剂 TCA），用前最好用 pH 试纸测试一下，不在上样液的 pH 范围时就用酸或碱调到正常范围。大量样品可用透析法调 pH。

19.上样自备的天然 PAGE 蛋白质标准或等电电泳的标准品（如果有的话）。

20.用 15 mA（对 0.75 mm 厚的胶）或 30 mM（对 1.5 mm 厚的胶）的电流电泳直

到染料移动到分离胶底部。微型胶一般需要 1-2 小时。注意：电泳过程最好在冷室或有冷却系统，以免电泳产热使蛋白质变性。

选择我们的一站式蛋白质非变性PAGE电泳试剂盒（高pH），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！