RT-LAMP MasterMix（荧光染料法）高特异性，精心优化的配方，非特异扩增比自配的试剂更低。

产品简介：

RT-LAMP MasterMix（荧光染料法）含有荧光 RT-LAMP 扩增所需的所有成分，可以用于实时荧光（但非定量）RT-LAMP 等温扩增。RT-LAMP 即 Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification（逆转录-环介导等温扩增），它利用 4 条模板专一的特异引物、逆转录酶和具有链置换能力的 Bst DNA 聚合酶，在等温条件下(65℃左右) 30－60 分钟完成逆转录和LAMP 扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于定性 RT-PCR 技术。目前已成功应用于生物的快速检测，广泛用于各个领域。

产品特点：

1.即开即用，含有 LAMP 专用的荧光染料，可以进行实时荧光检测（需要荧光 PCR 仪），但不建议用于定量分析。

2.高特异性，精心优化的配方，非特异扩增比自配的试剂更低。

3.高扩增效率，一般比 RT-PCR 灵敏一个数量级。

4.65℃左右同时完成逆转录和等温扩增，一步式操作。

5.本试剂盒足够 50 次 20 L 体系的实时荧光 RT-LAMP 扩增。

6.提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。

7.20 L 体系最多可以使用 13 L 样本，减少漏检。

8.RT-LAMP MasterMix（荧光染料法）只能用于科研，不能用于临床。

产品参数：

产品规格

成分规格包装

RT-LAMP MasterMix

（荧光染料法，待加酶）200 L0.5 mL 绿盖管

逆转录酶-扩增酶混合液100 L0.5 mL 红盖管

LAMP 阳性对照

模板-引物混合物50 L0.5 mL 蓝盖管

使用手册1 份无

保存和运输

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂

RNA 模板、RT-LAMP 引物

使用方法：

1.制备模板RNA：用于选用合适的方法制备模板RNA。如果有N个样品，最好设置N+2个样品制备，多出的两个一个是样品制备阳性对照，一个是样品制备阴性对照。

2.配制20×RT-LAMP引物混合液。

先加超纯水将合成的HPLC级别的下列引物干粉稀释到下表所标注的母液

浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水， 最后得到0.1 mL的20×RT-LAMP引物混合液，此混合液足够100次20 L

体系的RT-LAMP扩增。如果需要配制的20×RT-LAMP引物混合液体积异 于0.1 mL，则各成分的用量请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置2 年。

注：如果没有Loop引物，则用水替代。

3.在冰上融化RT-LAMP MasterMix（荧光染料法，待加酶），混匀，稍离心。第一次使用时，请将100uL逆转录酶-扩增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix中并轻柔颠倒混匀1分钟，然后再使用。如果有N个样品，则在 N+2个反应管中加入以下组份，多出的一管是RT-LAMP扩增阳性对照

（PC），一管是RT-LAMP扩增阴性对照（NC）：

成份N+2 个样品管RT-LAMP

扩增PCRT-LAMP

扩增 NC

RT-LAMP MasterMix

（含荧光染料，加酶后）6 L6 L6 L

自备 20×RT-LAMP

引物混合液1 L不加1 L

LAMP 阳性对照

模板-引物混合物不加4 L不加

自备模板 RNA1-13 L不加不加

补自备超纯水到20 L20 L20 L

4.混匀，放荧光定量PCR仪器上65℃保温90分钟，每分钟采集一次SYBR通道的荧光信号。

5.结果分析：实验有效性判定。如果两个阳性对照能够得到标准的S型扩增曲线而两个阴性对照都没有扩增，则实验有效，才有必要对样品进行分析。如果阳性对照没有出现S型扩增曲线，则说明试剂盒可能失效，实验无效。如果阴性对照有S型扩增曲线，则说明LAMP引物设计得不好，有非特异扩增， 需要重新优化引物。也可能是环境或试剂有污染，实验无效。遇到实验无效的情况，请跟厂家客户联系，分析原因后再恢复实验。

6. 如果实验有效，则分析样品。凡是有S扩增曲线的，可以判断为阳性。凡是

没有S扩增曲线的，可以判断为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性结果，扩增曲线为S型，右边为阴性结果，扩增曲线不呈S型。

选择我们的RT-LAMP MasterMix（荧光染料法），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！