免提取 LAMP 试剂盒（可视染料法）高特异性，精心优化的可视化 LAMP MasterMix 配方，非特异扩增比自配的 LAMP 试剂更低。

产品简介：

本产品是 4×LAMP MasterMix（可视染料法）和免提取样本 DNA 释放剂的组合。前者含有可视化 LAMP 扩增所需的所有成分，可以用于可视化 LAMP 等温扩增。免提取样本 DNA 释放剂可用于处理各种样品，直接不经过提取直接用于 PCR 或 LAMP 扩增。

产品特点：

1.即开即用，用户不需要单独准备每个成分。

2.不需要单独进行核酸纯化，LAMP 扩增后可以直接肉眼观察，不需任何设备。

3.高特异性，精心优化的可视化 LAMP MasterMix 配方，非特异扩增比自配的 LAMP 试剂更低。

4.4×MasterMix，比对应的 2×MasterMix 能使用能多的扩增模板。如果样品没有抑制物，最多可使用 11uL 进行扩增，降低漏检的机率。

5.高扩增效率，一般比 PCR 灵敏一个数量级。

6.本试剂盒足够 50 次免提取样本处理和 50 次 20uL 体系的 LAMP 扩增。

7.提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。

8.免提取 LAMP 试剂盒（可视染料法）只能用于科研，不能用于临床。

产品参数：

产品规格

免提取 LAMP 试剂盒第 1 部分，规格 50 次，5 孔盒包装，常温运输和保存。

成 份规 格包 装

免提取 DNA 模板制备

溶液 A 成分 10.1 mL0.5 mL 白盖管

免提取 DNA 模板制备

溶液 A 成分 20.1 mL0.5 mL 紫盖管

免提取 DNA 模板制备

溶液 B0.5 mL0.5 mL 绿色盖

免提取 LAMP 试剂盒第 2 部分：规格 50 次，5 孔盒包装，低温运输，-20℃保存。

成 份规 格包 装

4×LAMP MasterMix

（可视染料法，待加酶）200uL0.5mL 黄盖管

Bst DNA 聚合酶50uL0.5mL 红盖管

阳性对照模板-引物混合物50uL0.5mL 蓝盖管

使用手册1 份

保存和运输

第 1 部分常温运输和保存，第 2 部分低温运输，-20℃保存。有效期一年。

自备试剂

超纯水、LAMP 模板、LAMP 引物

使用方法：

1.打开金属浴或 PCR 仪，把温度调到 95℃。

2.配制 1mL 工作液（足够 10 个样品，如果样品不止 10 个，需要按比例增加）：

在一干净的 1.5mL 自备塑料离心管中加入 10uL 免提取模板制备溶液A 成分 1，20uL 免提取模板制备溶液 A 成分 2 和 970uL 超纯水，充分混合均匀待用。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完。

3.标记 10 个 PCR 管（方便后续用 PCR 仪加热保温），分别加入 100 uL 上步所配制的溶液 A 工作液。

4.参考下表在管中加入待处理样品。如果是固体样品，需要确保固体样品被溶液 A 工作液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀即可。动物组织 1-5 mg、鼠尾 2mm、血液样品不超过 20 uL、植物叶片 1-5 mg、植物种子 1-5 mg、0.2-0.5mL微生物培养物离心所得的沉淀、血清血浆等蛋白浓度高的液体样品 10-30 uL、其他液体样品（如保存液中的病毒样品）50-100 uL。对上表未列出的样品，用户需要自己摸索最佳用量。对富含多醌多酚的植物材料（如棉花），使用量最好不要超过 0.5mg。

5.在金属浴或 PCR 仪上 95℃保温 10 分钟。

6.待冷却到常温。

7.每个管中加入 10uL 溶液 B 并轻柔吹打混匀得 DNA 释放液。这些 DNA 释放液足够进行 50-100 次 PCR 或 LAMP 扩增。

8.配制5×LAMP引物混合液。

先加超纯水将合成的HPLC级别的下列引物干粉稀释到标准所标注的母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水，最  后得到1mL的5×LAMP引物混合液，此混合液足够250次20uL体系的LAMP 扩增。如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积异于1mL，则各成分的用量 请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置2年。

引物名称母液浓度加母液量在 5×LAMP 引物

混合液中的浓度

FIP 引物100 uM80 uL8 uM

BIP 引物100 uM80 uL8 uM

F3 引物100 uM10 uL1 uM

B3 引物100 uM10 uL1 uM

Loop F100 uM20 uL2 uM

Loop B100 uM20 uL2 uM

超纯水780 uL

终体积1 mL

注：如果没有Loop引物，则用水替代。

9.在冰上融化4×LAMP MasterMix（可视化法），混匀，稍离心。第一次使用时，请将50uL Bst DNA聚合酶全部加入到4×LAMP MasterMix中轻柔混匀，然后再使用。如果有N个样品，则在N+2个反应管中加入以下组份，多出的一管是LAMP扩增阳性对照（PC），一管是LAMP扩增阴性对照（NC）：

10.混匀，置于65℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴或水浴保温，没有热盖，必须覆盖50uL的石蜡油，否则保温期间反应  体系的水分会蒸发，严重影响反应效率。

11.扩增结束后肉眼观察结果判断阴性和阳性。典型的结果见下图：左边管为阴  性，右边两个管为阳性。

12.结果分析：如果本试剂盒提供的阳性对照-引物混合物呈现阳性而阴性对照  为阴性，则实验有效。如果阳性对照-引物混合物呈现阴性，则操作有问题  或者试剂盒有问题，请跟厂家联系。如果阴性对照（水作为模板）也呈现阳  性，则说明LAMP样品或试剂有过去的扩增产物的污染，需要注意操作的规范性，如果不能解决，可以重新设计引物扩增新的靶片段。

13.也可以电泳检测实验结果（强烈不推荐此法，因为电泳时产生的气溶胶非常  容易污染环境，使得今后用同一引物扩增时产生假阳性）：取5-10uL扩增产物和自备的上样液混合，上样，进行2-3%的琼脂糖凝胶电泳，有LAMP扩增

的样品将可见LAMP特征性电泳图谱。

选择我们的免提取 LAMP 试剂盒（可视染料法），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！