随机引物法 DNA 探针标记试剂盒（自备标记核苷酸型）所需模版 DNA 量少，模板可以是线状或环状的、也可以是单链或双链的，但长度必须在 100 bp 以上。

产品简介：

本产品是基于Feinberg 和Vogelstein 发明的随机引物标记法而开发出来的即用型 DNA 探针标记试剂盒，标记过程由双链 DNA 热变性、随机引物与单链 DNA 结合、在 Klenow DNA 聚合酶催化下，引物的延伸合成 DNA 探针并掺入标记的核苷酸三步组成，可用下面的示意图表示：

产品特点：

1.提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分，简化了反应加样步骤，提高了标记反应的可重复性。

2.使用无外切活性的 Klenow exo- DNA 聚合酶，已标记DNA 探针不会被酶降解，探针产量更高。

3.快速，最快 1 小时即可完成标记反应。

4.得到的 DNA 探针比活性高（如果是同位素，可以达到 10E9 cpm/ug DNA）。

5.所需模版 DNA 量少，模板可以是线状或环状的、也可以是单链或双链的，但长度必须在 100 bp 以上。

6.得到的探针长度一般在 200-400 nt 之间（如果模板长度在 1kb 以上），可以用于 Southern 杂交、Northern 杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。

7.本产品足够 5 次标记实验。

8.随机引物法 DNA 探针标记试剂盒（自备标记核苷酸型）只能用于科研。

产品参数：

成份  规格包装

10×随机引物标记反应液10 μL0.5 mL 绿盖管

(自备标记核苷酸型)

Klenow exo-聚合酶 5 μL0.5 mL 红盖管

dATP，2 mM 10μL0.5 mL 白盖管

dTTP，2 mM 10μL0.5 mL 紫盖管

dGTP，2 mM 10μL0.5 mL 蓝盖管

dCTP，2 mM 10μL0.5 mL 黄盖管

标记专用随机引物溶液 10μL0.5 mL 橙盖管

超纯水 1 mL1.5 mL 本色管

使用手册 1 份无

运输及保存

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂

0.5 M EDTA（pH 8.0），需要自备标记的核苷酸。

使用方法：

注意：随机引物标记效率跟起始模板量和保温时间相关，杂交时需要探针 DNA 必须达到一定的浓度，其中探针/模板比越高，没有标记的模板 DNA 对杂交的竞争性抑制越低。用户在实验前可以根据下表选择合适的起始模板量和保温时间：

1. 在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分：

成分用量

模板 DNA50-150 ng

随机引物2 μL

10×随机引物标记反应液2 μL

超纯水补水到 15 μL

注意：非同位素标记基团（如生物-素和地-高辛）疏水性强，易与塑料离心管表面非特异性结合，所以要硅化塑料离心管。模板 DNA 并非越多越好，否则没有标记的模板 DNA 在杂交时会竞争性地抑制标记 DNA 跟靶分子的杂交，反而降低杂交信号强度。

2.沸水浴 10 分钟，或在PCR 仪上 100℃加热 10 分钟彻-底变性模板 DNA，结束后需要立即放冰上待用。不能缓慢降温，否则变性的模板 DNA 单链又会杂交形成双链。

3.离心数秒使所有液体集中在管底，如果标记物为 dTTP 则加入除 dTTP 之外的三种核苷酸（dATP、dGTP、dCTP）各 1 μL（共 3 μL，浓度均为 2mM），自备的 dTTP/标记dUTP 混合物 1μL，最后加入 1 μL Klenow exo 聚合酶。如果标记物为 dCTP 则加入除 dCTP 之外的三种核苷酸（dATP、dGTP、dTTP）各 1 μL，以此类推。

注：dTTP/标记 dUTP 混合物中dTTP 和标记 dUTP 的总浓度必须达到2mM， dTTP 与生物-素标记dUTP 或地-高辛标记的 dUTP 的比例在 65：35 为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸，如 fluorescein、hydroxycoumarin、 resorufin 和 aminoallyl 标记的 dUTP，则用户需要自己摸索其与 dTTP 之间的最佳比例，如果使用 32P 标记的dUTP，则比活最好为 3000Ci/mmol，浓度为好为 10uCi/μL，并且不需要加入 dTTP。

4.轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上，离心数秒使所有液体集中在管底。

5.37℃保温 1-20 小时。反应结束后加热 100℃ 5 分钟使 DNA 聚合酶变性， 同时使 DNA 探针变性成单链，然后立即冰上冷冻。不能缓慢降温，否则变性的模板 DNA 单链又会杂交形成双链。

6.变性后的标记反应液可以放-20℃长期保存，也可以直接加入到杂交反应液中进行杂交。如果电泳检测，标记产物将是弥散状态。

注意：本方法标记核苷酸掺入率极-高，因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化， 不要用酚抽提法纯化非同位素标记的 DNA 探针，因为这些标记分子（如生物-素或地-高辛等）疏水性强，能使标记的 DNA 进入疏水的有机相而丢失。只能选择乙醇直接沉淀或 Sephadex G50 过柱回收（需另购柱式探针纯化试剂盒）。对比活高

的同位素标记探针，由于同位素其极其不稳定，因此应该立即使用，不要长久放置。

选择我们的随机引物法 DNA 探针标记试剂盒（自备标记核苷酸型），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！