真菌RNA纯化试剂盒（过柱法）柱式操作，更加简单快捷，整个过程只需要约 30 分钟。

产品简介：

本产品专门用于真菌 RNA 的纯化。

产品特点：

1.柱式操作，更加简单快捷，整个过程只需要约 30 分钟。

2.RNA 纯度高，OD260/280 一般都在 2.0 左右，可直接用于 RT-PCR、 Northern 杂交、microarray hybridization、 cDNA 合成等实验。

3.RNA 产量高，一般在 20-70 μg/mL 酵母培养物(约 2E7 个细胞)。

4.非酶细胞破裂法，适用于各种形态和各个种属的真菌，包括Candidaalbican、          Saccharomycescerevisiae、Schizosaccharomycespombe、Pichiapastoris等。

5.本产品足够 50 次微量纯化实验。

6.真菌RNA纯化试剂盒（过柱法）只能用于科研。

产品参数：

成 份规 格包装材料

真菌 RNA 纯化溶液 A20 mL30 mL 本色瓶

真菌 RNA 纯化溶液 B25 mL30 mL 棕色玻璃瓶

真菌 RNA 纯化溶液 C75 mL125 mL 本色瓶

真菌 RNA 纯化溶液 D25 mL30 mL 本色瓶

离心吸附柱50 套塑料袋

通用洗柱液50 mL60 mL 本色瓶

RNA 洗脱液10 mL10 mL 本色瓶

使用手册1 份1 份

运输及保存

常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂

氯仿

使用方法：

1.将 50 mg 左右的干菌丝(或 100 mg 左右的鲜菌丝、适当数量的真菌菌落)转移到 1.5 mL 塑料离心管中。如果是液体真菌培养物，则直接将 1-10 mL 液体真菌在 1.5 mL 塑料离心管中 12,000-15,000×g 离心 1 分钟，并弃尽液体培养基（可以分多次离心）。

2.加入 0.4 mL 真菌 RNA 纯化溶液 A 并充分吹打混匀。如果真菌 RNA 纯化溶液 A 存放时产生沉淀，请置于 65℃融化，用前充分摇晃均匀。

3.加入 0.4 mL 溶液 B，剧烈振荡 30 秒。

4.65℃保温 5 分钟。

5.室温 12,000-15,000×g 离心 3-5 分钟，转移上清到一干净的 1.5 mL 塑料离心管中。

6.再加入 0.1 mL 真菌 RNA 纯化溶液 B 和 0.1 mL 自备氯仿，振荡混匀 30 秒。

7.室温 12,000-15,000×g 离心 3-5 分钟，转移上清到一自备的、干净的 5 mL 塑料离心管中。

8.加入相当于上清 3 倍体积的真菌 RNA 纯化溶液 C（约 1.2-1.5 mL）和 1 倍体积的溶液 D（约 0.4-0.5 mL），充分混匀。

9.将混合液（约 2.5 mL）分 3-4 次转移到离心吸附柱中。每次 13,000-15,000×g 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。

10.用 0.5 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。

11.一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用 0.5 mL 通用洗柱液重复此步一次。

12.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的洗柱液会影响 RNA 的使用。

13.将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 1.5 mL 塑料离心管中，加入 30-100 μL RNA 洗脱液。

14.室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

15.RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳。

16.RNA 产量产率测定：将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH 7.5-8.2 之间)检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度×体积)和产率(RNA 产量/真菌用量)。注意不要将 RNA稀释在DEPC 水中检测 OD260 和 OD280，否则光吸收比在 TE 中测得的低 10%-15%。

17.RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230 一般在 2.0-2.3 之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。蛋白质污染可以通过酚/氯仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA 和多糖污染可以分别用多糖清除剂去除。测 OD 时 RNA 不能过度稀释使 OD 读数低于仪器的有效范围，如果低于一起的检测范围，该读数无效。

选择我们的真菌RNA纯化试剂盒（过柱法），就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！