酵母菌落PCR试剂盒既可用酵母菌落，也可用酵母培养液。高灵敏度，既可用于扩增酵母质粒，也可以用于扩增酵母基因组 DNA。

产品简介：

菌落 PCR 是筛选重组子的有效方法，可以使质粒鉴定过程从两天缩短到几小时。但如果宿主是酵母，其菌落 PCR 的难点则是破壁，因为酵母的细胞壁比细菌坚韧许多。本产品是基于玻璃珠破壁方法而开发的酵母菌落 PCR 产品。

产品特点：

1.破壁效率高，甚至可以用于野生型酵母。

2.既可用酵母菌落，也可用酵母培养液。

3.条件温和，菌落 PCR 可以扩增长达 3 kb 的 DNA。

4.既可小规模筛选，也适用于大规模筛查。

5.高灵敏度，既可用于扩增酵母质粒，也可以用于扩增酵母基因组 DNA。

6.PCR 反应液中含有惰性电泳染料，反应后可直接上样电泳，不需另加上样液。

7.处理过的酵母菌落样品低温长期保存后仍能用于 PCR 筛查。

8.酵母菌落PCR试剂盒足够 100 次 60 μL 体系的酵母菌落 PCR（细菌菌落 PCR 需要用另一款产品）。

产品参数：

成份 规格包装

酵母破壁液 2×1 mL1.5 mL 绿盖管

2×PCR MasterMix

（菌落筛选专用） 2×1.5 mL1.5 mL 红盖管

酸洗玻璃珠400-600 μm 3 g2.0 mL 本色管

使用手册 1 份1 份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

自备试剂

酵母菌落，模版专一性引物，TE 缓冲液。

使用方法：

一、 酵母破壁

1.如果有 N 个样本，则标记 N+2 个 1.5 mL 的塑料离心管，N 个用于样本， 一个用于阳性对照 PC（Positive Control，确认有质粒阳性的样本），一个用于阴性对照 NC（Negative Control，可以用水代替）。

2.在每个管中加入 20 μL 酵母破壁液。

3.挑入一个新鲜酵母菌落（芝麻大小即可）或 2 μL 酵母饱和菌液。

4.加入体积跟酵母破壁液相当的酸洗玻璃珠（重量在 20-30 mg）。

5.涡旋震荡 3 分钟。

6.常温 10000 rpm 离心半分钟后可以直接取上清作为模板立即进行 PCR。如果不立即进行PCR，需将上清全部转移到新离心管中（至少可以取出 15 μL），再加入等体积的自备 TE 缓冲液，放-20℃待用。TE 缓冲液中的 EDTA 可以抑制样本中残留 DNase 的活性，可以使 DNA 的放置时间更长。

二、PCR 扩增

7. 在一个 1.5 mL 的预冷塑料离心管中分别加入下列预冷成份并充分混匀 ， 得到 PCR 预混液并放冰上待用。由于有 N+2 个样本，所以配制时多加一个， 按 N+3 计算：

7.将上步得到的预冷 PCR 预混液按 59 μL/管分装到 N+2 个标记并且预冷的 PCR 管中。

8.将第 6 步制备的N+2 个样品各取 1 μL 加入上步加有 59 μL 混合液的 PCR管中。PC 样到 PC 管，NC 样到 NC 管，1 号样品加入到 1 号 PCR 管中，以此类推。由于裂解液含大量 PCR 抑制物，样本用量不要超过 1.5 μL，否则样本加得越多，PCR 越容易被抑制。

9.将 N+2 个预冷的 PCR 管快速放入 PCR 仪器中进行扩增，PCR 温度参数根据引物和模板情况由客户自己预先确定。

10.PCR 结束后直接取 10 μL 电泳直接进行琼脂糖电泳分析。本试剂盒提供的 PCR MasterMix（菌落筛选专用）中已经含有电泳示踪剂和促沉剂，故可以直接上样。橙黄色电泳染料的泳动速度对应于 50 bp 的 DNA，蓝色电泳染料的泳动速度对应于 3-5 kb 的 DNA。

11.如果阴性对照 NC 有预期大小的扩增产物，则无论阳性对照 PC 和 N 个样本的结果如何，整个实验无效。说明环境污染，需要解决污染问题再继续。  如果阳性对照 PC 没有预期大小的片段，且没有任何样本呈现阳性，则很可能是试剂、程序、引物、仪器等有问题，需要解决问题后再继续。如果有任 何一个样本呈现阳性（不包括阴性对照），则实验有效，可以继续分析每个样  品。

12.如果阳性对照有预期大小的片段，阴性对照没有，则整个实验有效。可以分析每个样品。每个样品如果有预期大小的扩增产物，则初步判断为阳性。  如果没有，则判断为阴性。

13.对阴性样本，可以用超纯水将其稀释 10 倍、百倍、千倍、万倍 4 个稀释度， 然后一起再进行 PCR 检测，如果某个稀释度的样本出现预期扩增产物，则测试时需要先将样本稀释到该稀释度后再测。

14.可以将阳性样品对应的菌落再挑出来进行培养并进行进一步的分析。

选择我们的酵母菌落PCR试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！