cDNA 第二链合成试剂盒即开即用，含有合成 cDNA 第二链的所有试剂，包括 RNase H、E.coli DNA
聚合酶 1 和 DNA 连接酶。

产品简介：

cDNA 第二链合成试剂盒的起始材料是已经完成第一链 cDNA 合成的RNA-DNA 杂交链。其原理是用 RNase H 使 RNA-DNA 杂合链中的 RNA 产生切口，再用 DNA Polymerase I 通过切口平移(nick translation)反应进行 RNA链取代合成 cDNA 第二链，其示意图如下:

产品特点：

1.即开即用，含有合成 cDNA 第二链的所有试剂，包括 RNase H、E.coli DNA聚合酶 1 和 DNA 连接酶。

2.一管式操作，不需要每次进行纯化，不丢失宝贵的样品。

3.所得双链 cDNA 可以直接用于后续的常规 PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等。

4. 本试剂盒足够 10 次 80 uL 体系的 cDNA 第二链合成反应。

产品参数：

名称 规格包装

5×cDNA 第二链合成缓冲液 160 μL0.5 mL 白盖管

20×cDNA 第二链合成

酶混合液 40 μL0.5 mL 黄盖管

0.2 M EDTA 溶液 60 μL0.5 mL 本色管

超纯水 1 mL1.5 mL 蓝盖管

使用手册 1 份无

运输及保存

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂

cDNA 第一链合成试剂等

使用方法：

一、合成 cDNA 第一条链

本试剂盒不提供 cDNA 第一链合成试剂，用户需自备相关试剂合成 cDNA

第一链。

二、合成 cDNA 第二链

1.在冰浴上向 10uL 已经完成 cDNA 第一条链合成的反应体系（逆转录体系） 中依次加入下表试剂，如果多于 10uL，请只取用 10uL：

注：克隆双链 cDNA 一般需要平末端化，需要 T4 DNA 聚合酶处理步骤。PCR、SSH 等后续处理一般不需要把双链 cDNA 平末端化，则可以跳过 T4 DNA 聚合酶处理步骤，直接用 EDTA 终止反应。

2.终止反应：如果后续实验(如电泳)不担心 EDTA 的影响，可以直接加入 4 uL 0.2M EDTA 溶液终止反应，然后将样品放-20℃长期保存。如果后续实验

（如PCR 扩增）不担心 cDNA 的单双链状态，可以 95℃保温 10 分钟终止反应。如果后续实验既受 EDTA 影响，又不能是单链 DNA，则可以用 PCR 过柱纯化法纯化。

3.电泳 5 μL 检测 cDNA 质量。如果 cDNA 在 0.5-10Kb 的范围内呈模糊一片，则 cDNA 合格。如果没看见 cDNA 或有其他异常，需查找原因后再继续。

4.所得 cDNA 可以直接用于后续的常规 PCR、real-time PCR、cDNA 文库

构建、抑制性差减杂交（SSH）等实验。

选择我们的cDNA 第二链合成试剂盒，就是选择精准、高效、可靠的检测方案，为您的科研实验保驾护航！